Определение мочевины в биологических жидкостях уреазным (фенол-гипохлоритным методом)

Принцип метода. Мочевина под действием уреазы гидролизуется с образованием ионов аммония. Ионы аммония реагируют в присутствии нитропруссида с фенолом и гипохлоридом, образуя окрашенный комплекс. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевины в пробе.

Исследуемый материал: сыворотка крови, плазма, моча. Перед проведением анализа необходимо развести мочу в 100 раз дистиллированной водой.

Реагенты.

1. Стабилизированный раствор уреазы.

2. Стандартный раствор мочевины – 5 ммоль\л.

3. Фенол\нитропруссидный реагент.

4. Гипохлорит.

Проведение анализа.

Реагенты Опыт Стандарт Контроль

Реагент 1 (уреаза) 1,0 1,0 1,0

Вода дист. - - 0,1

Реагент 2 (мочевина) - 0,1 -

Сыворотка или разв. моча 0,1 - -

Тщательно перемешать и инкубировать не менее 5 минут при комнатной температуре не ниже 20°. После окончания инкубации во все пробы внести

Реагент 3 1,0 1,0 1,0

Реагент 4 1,0 1,0 1,0

Инкубируют на водяной бане 15 минут при 37°. После окончания инкубации измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против контрольной пробы в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5 мм при длине волны 540 нм. Окраска стабильна в течение нескольких часов.

Расчет концентрации мочевины проводят по формуле:

Доп.

Сыворотка: С = -------- * 5 ммоль\л

Д ст.

Доп.

Моча: С = -------- * 500 ммоль\л

Дст.

Нормальные величины: сыворотка – 2,5 – 8,3 ммоль\л

моча - 333 – 583 ммоль\л

Определение креатинина в биологических жидкостях.

Креатин поступает в организм с пищей (экзогенный креатин) и синтезируется в организме (эндогенный креатин), преимущественно в печени. Далее креатин поступает в кровь и с током крови в мышечную ткань. Здесь креатин, фосфорилируясь, превращается в креатинфосфат, который используется для мышечного сокращения.

Далее креатинфосфат превращается в креатинин. Креатинин выводится в кровь и выделяется из организма через почки, являясь беспороговым веществом. Следовательно, креатин определяется в крови, а креатинин – в крови и в моче.

Содержание креатинина в крови здоровых людей величина довольно постоянная и малозависящая от питания. В большей степени содержание креатинина зависит от мышечной массы тела и физической активности.

Диагностическое значение имеет увеличение содержания креатинина в крови. Так как выведение креатинина из организма происходит через почки, то нарастание его содержания происходит параллельно нарастанию азотемии. По степени увеличения содержания креатинина в крови можно судить о нарушении выделительной функции почек: удвоение содержания креатинина в крови соответствует снижению клубочковой фильтрации на 50%.