2. Методика выполнения работы.
Для решения поставленных задач нами были освоены и применялись следующие методики лабораторного анализа бактериальной обсемененности рук.
Методика взятия смывов с рук.
Эта процедура проводится с помощью одноразовых стерильных ватных тампонов на пластиковых палочках. Перед взятием смывов заранее подготавливаются пробирки с закручивающимися крышками. В каждую пробирку добавляется 5 мл физиологического раствора. Пробирки подписываются маркером, указывается вариант дезинфекции и имя испытуемого.
При взятии смывов с рук тампон смачивается физиологическим раствором, после этого протирают тампоном ладонную поверхность рабочей руки, проводя не менее 5 раз по ладони и пальцам, затем протирают межпальцевые пространства, околоногтевые валики, пространство под ногтем. Тампон помещают в пробирку и тщательно отмывают.
Методика посева на неселективную питательную среду.
Оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды: термостат, микроволновая печь, весы лабораторные электронные, термометр электронный, лупа для подсчета колоний, дозатор пипеточный, мерные цилиндры различной вместимости, чашки Петри одноразовые, колбы конические, стеклянная воронка, шпатель лабораторный химический, агар питательный сухой.
Питательный агар готовится из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке. Мясопептонный агар – это плотная или полужидкая универсальная питательная среда, состоящая из мясопептонного бульона с добавлением 0,5-2% агара и применяемая для выращивания большинства патогенных микробов.
Из каждого смыва делали посев не менее двух объемов по 1 мл. После тщательного перемешивания 1 мл смывной жидкости вносят с помощью механического дозатора в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышки. После этого в каждую чашку вливают 8-12 мл расплавленного и остуженного до 45-49°С питательного агара. Содержимое чашек аккуратно перемешивают, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки. Эту процедуру производят на горизонтальной поверхности, где чашки оставляют до застывания агара. После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат и инкубируют при температуре 37°С в течение 48 часов. После подсчитывают все выросшие на чашке колонии. Учитывают только те чашки, на которых выросло не более 300 изолированных колоний. Количество колоний на чашках суммируют и делят на количество чашек. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды.
Исследование проводилось на базе школьной лаборатории кабинета биологии ГБОУ Школы №2030. Для проведения исследования были выбраны трое учащихся 10 класса, у которых поэтапно проводились смывы с рук, обработанных с применением различных средств дезинфекции (96% раствор спирта, гелевый антисептик с содержанием этилового спирта 66.2%, антисептическое жидкое мыло, твердое мыло, влажные гигиенические салфетки). Каждый смыв высевался в трех повторностях. При этом в качестве отрицательного контроля проводился анализ смывов с рук, ничем не обработанных (грязные руки). Помимо этого регулярно проводился посев пустой пробы. Пустая проба учитывает, что бактериологический посев проводился в условиях отсутствия стерильного бокса, и подразумевает посев среды без смыва но с 1 мл физиологического раствора.
Обработка рук средствами дезинфекции проводилась согласно методике, разработанной ВОЗ (прил. 1 и прил.2).