Классификация диагностических серо-логических реакций по природе АГ, тех-нике постановки и механизму протекания
Реакции агглютинации
Реакции преципитации
Реакции лизиса
Реакция нейтрализации
Реакция иммунофлуоресценции
Иммуносорбентные реакции
Реакция агглютинации с lgM-антителами
(А) и lgG-антителами (Б)
Развернутая реакция агглютинации и на стекле
Для определения групп крови:
а- отрицательная; б- положительная
Реакция агглютинации (РА)
(от лат. agglutinatio - склеивание) - склеивание корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов, частиц с адсорбированными на них антигенами) антителами в присутствии электролитов (например, изотонического раствора хлорида натрия).
Проявляется в виде
хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например, бактерий) «склеенных» антителами. Реакцию агглютинации используют для следующих целей:
определение возбудителя,
выделенного от больного;определение
противомикробных и других антител в сыворотке крови больного;
определение группы крови
Реакция непрямой
гемагглютинации: 1.позволяет выявить антитела с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами (с О-антигенами брюшнотифозных бактерий).
Эритроциты (или частицы
латекса) с антигенами взаимодействуют с
Постановка и учет РНГА соответствующими
антителами, что вызывает склеивание и выпадение на дно в виде фестончатого осадка («зонтика»). При
отрицательной реакции эритроциты оседают в виде «пуговки».
2. Для определения антигенов применяют антительный эритроцитарный диагностикум - эритроциты, на которые адсорбированы антитела.
Реакция
коагглютинации
применяют для определения антигенов с помощью антительного диагностикума - антител, адсорбированных на белке А клеток стафилококка. Белок А стафилококков имеет сродство к Fc- фрагменту IgG, поэтому при обработке иммунной диагностической сывороткой стафилококки адсорбируют антитела.
Реакция Кумбса - непрямая реакция агглютинации для определения
антирезусных (неполных) антител . У некоторых больных обнаруживают антирезусные антитела, которые являются неполными, одновалентными. Они специфически взаимодействуют с резус-положительными эритроцитами (Rh + ), но не вызывают их агглютинации. Для агглютинации в систему «антирезусные антитела + резус- положительные эритроциты» добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобулинов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов
Реакция торможения
гемагглютинаци (РТГА) Гемагглютинины
вирусов склеивают эритроциты.
Это свойство используют в реакции гемагглютинации для индикации и титрования вирусов, что необходимо для последующей постановки РТГА.
РТГА основана на блокаде антигенов вирусов (гликопротеиновых «шипов» - гемагглютининов) антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты.
РТГА применяют для диагностики инфекций, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита ) могут агглютинировать эритроциты различных животных.
|
(от лат. praecipito - |
|
осаждать) - это |
1 |
формирование и осаждение |
комплекса растворимого |
|
|
молекулярного антигена с |
|
антителами в виде |
|
помутнения, называемого |
|
преципитатом. |
|
Он образуется при |
|
смешивании антигенов и |
|
антител в эквивалентных |
|
количествах. Избыток одного |
|
из них снижает уровень |
|
образования иммунного |
|
комплекса. |
|
РП ставят: |
|
в пробирках (реакция |
|
кольцепреципитации), рис.1, |
|
в гелях, |
|
питательных средах. |
|
Распространение получили |
|
разновидности РП в |
|
полужидком геле агара или |
3 |
агарозы: |
двойная иммунодиффузия по |
|
|
Оухтерлони, |
|
Реакция преципитации |
радиальная иммунодиффузия, рис.3, иммуноэлектрофорез.
РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана).
Реакция связывания
комплемента
заключается в том, что при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), т. е. происходит связывание комплемента комплексом антиген-антитело.
Если же комплекс антиген-антитело не образуется, то комплемент остается свободным РСК проводят е две фазы:
1-я фаза - инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент; 2-я фаза (индикаторная) -
выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним (вторая пара Аг+Ат).
Реакция нейтрализации
Антитела иммунной
сыворотки способны
нейтрализовать повреждающее действие микробов и их токсинов на чувствительные клетки, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.
Реакцию нейтрализации
проводят путем введения смеси антиген-антитело животным или в чувствительные тест- объекты (в культуру клеток,
эмбрионы).
Отсутствие у животных и тест- объектов повреждающего действия микроорганизмов, их антигенов, токсинов свидетельствует о
нейтрализующем действии
иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело
Иммуноферментный
анализ
выявление антигенов или антител с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом- меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой).
После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат пероксидазы - перекись водорода.
Субстрат расщепляется ферментом, что в конечном итоге приводит изменению цвета продукта реакции: интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Твердофазный ИФА — вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитело ) сорбирован на твердом носителе, например в лунках планшеток из полистирола.