Prezentaciya-3
.pdf
Флуоресцентная проточная цитометрия
•Флуоресцентный краситель связывается с нуклеиновыми кислотами, которые содержатся в клетках крови.
•Прибор анализирует несколько сигналов:
1.Прямое светорассеяние (размер клетки);
2.Боковое светорассеяние (внутреннее содержимое);
3.Флуоресцентный сигнал (содержание ДНК/РНК)
Флуоресцентная технология и тромбоциты (RET-канал)
Прямое светорассеяние (размер)
Достаточно далеко располагаются друг от друга пул эритроцитов и тромбоцитов
В тромбоцитах также присутствуют РНКсодержащие структуры, что позволяет проводить окрашивание флуоресцентными красителями
Специальный реагент перфорирует |
Флуоресцентный сигнал |
|
клеточную мембрану, а через поры |
||
|
||
входит флуоресцирующий краситель |
|
Флуоресцентная технология и тромбоциты (PLT-F – канал)
Тромбоциты хорошо отделяются от фрагментов, что особенно заметно при анализе популяции тромбоцитов и фрагментов на 3-мерной скатерограмме
Специальный краситель окрашивает ДНК/РНКсодержащие внутриклеточные структуры в тромбоцитах (рибосомальную РНК, митохондриальную ДНК)
Микрофотография взята из презентации А. Москаленко Sysmex rus
Интерференция при измерении в PLT-F канале
•Крайне редко могут регистрироваться ошибки при измерении тромбоцитов в PLT-F канале. Появляется неправильное распределение на скатерограмме.
Правильной формы |
|
Зона детекции |
|
Нет четкого разделения |
правильности измерения |
||
скатерограмма |
|||
тромбоцитов |
|||
между дебрисом и кластером |
|||
|
|||
|
тромбоцитов |
|
Флаг PLT-clumps
•Анализатор сигнализирует о наличии микросгустков в данной пробе.
•Важно, что иногда мы видим агрегаты тромбоцитов в мазке крови, но анализатор выдал тромбоциты без флага. Это может быть связано с тем, что микроагрегаты могут расходиться в направленном потоке жидкости, могут диссоциировать при повышенной температуре (PLT-F – 410C), или воздействия реагентов в некоторых каналах.
Флаг PLT-clumps области детекции
•На гистограмма PLT;
•На скатерограмме WNR;
•На скатерограмме WDF;
•На скатерограмме PLT-F.
Флаги PLT-clumps на других типах анализаторов
•Снижение уровня тромбоцитов, повышение среднего объема тромбоцитов, изменения на тромбоцитарной гистограмме.
•Изменения на гистограмме распределения по объему лейкоцитов (не начинается с базовой линии) и эритроцитарной гистограмме.
•Графическая информация на NRBC-плоте.
Фракция незрелых тромбоцитов
•Период созревания в крови тромбоцитов 1-2 дня
•Фракция незрелых тромбоцитов отражает тромбопоэтическую активность костного мозга
Фракция незрелых тромбоцитов
•Недавно покинувшие костный мозг тромбоциты имеют более крупные размеры и содержат большую концентрацию РНК.
•Было установлено, что данная РНК используется незрелыми тромбоцитами для синтеза белка.
•Незрелые тромбоциты циркулируют в периферической крови 24-36 часов.
•Постепенно в незрелых ретикулоцитах происходит деградация РНК и уменьшается их объем.
•Число незрелых тромбоцитов связано с активностью тромбоцитопоэза – при усилении наблюдается повышение уровня незрелых тромбоцитов, при снижении продукции тромбоцитов количество незрелых тромбоцитов падает.
Фракция незрелых тромбоцитов, референтные интервалы*
Есть ряд проблем – большинство данных получены в ходе одноцентровых исследований, при проведении исследований показателей одной популяции пациентов на разных приборах были получены разные результаты, особенно по верхней границе референтного интервала.
*Buttarello M, Mezzapelle G, Freguglia F, Plebani M. Reticulated platelets and immature platelet fraction: Clinical applications and method limitations. Int J Lab Hematol. 2020 Aug;42(4):363-370. doi: 10.1111/ijlh.13177. Epub 2020 Mar 10. PMID: 32157813.