Лабораторная работа № 6 сложные белки

Сложными белками являются высокомолекулярные комплексы, состоящие из белка и связанной с ним небелковой части, называемой простетической группой.

К сложным белкам относят: нуклеопротеиды, кофакторпротеиды, глюкопротеиды, фосфопротеиды и др. Все они играют важную биологическую роль. К сложным белкам относятся и двухкомпонентные ферменты.

1. Нуклеопротеиды

Нуклеопротеиды играют исключительно важную биологическую роль. Они построены из белка и нуклеиновой кислоты. Нуклеиновая кислота или полинуклеотид построена из большого числа мононуклеотидов.

Конечными продуктами гидролиза мононуклеотидов являются пуриновые или пиримидиновые основания, углевод (рибоза или дезоксирибоза) и фосфорная кислота. Составные части нуклеопротеидов открывают с помощью специальных реакций.

Проведение гидролиза

Ход работы: Берут 0,5 г свежих или 0,1 г сухих пекарских дрожжей, заливают 4 мл 10% раствора H₂SO₄. Гидролиз можно проводить в большой пробирке, которую закрывают пробкой с вставленной в нее длинной стеклянной трубкой. Для гидролиза необходимо нагревать пробирку примерно час с момента закипания. По истечении времени жидкость охлаждают и фильтруют.

Биуретовая реакция на наличие полипептидов

Берут 5 капель гидролизата, 10 капель 10% раствора NaOH и 1-2 капли 1% раствора CuSO₄. Развивается сине-фиолетовое или красно-фиолетовое окрашивание, указывающее на присутствие полипептидов. Последние образовались в результате гидролиза белков, входящих в состав нуклеопротеидов.

Серебряная проба на пуриновые основания

Берут 10 капель гидролизата, добавляют 1 каплю концентрированного раствора аммиака (чтобы создать нейтральную среду) и 5 капель 1% раствора AgNO₃. Через несколько минут выпадает осадок серебряных производных пуриновых оснований бурого цвета.

Реакция протекает по урвнению:

Проба Фелинга на углевод (рибозу и дезоксирибозу)

Первоначально получают реактив Фелинга. Для этого в пробирке смешивают 5 капель 7% раствора сернокислой меди и 5 капель раствора сегнетовой соли. К полученному реактиву добавляют 5-7 капель гидролизата, перемешивают и нагревают до кипения, выпадает осадок оксида меди (I) красного цвета.

Молибденовая проба на фосфорную кислоту.

К 5 каплям гидролизата добавляют 20 капель молибденового реактива (раствор молибденовокислого аммония в азотной кислоте) и кипятят. Появляется окраска лимонно-желтого цвета. Охлаждают пробирку под краном, выпадает осадок лимонно-желтого цвета за счет комплексного образования фосфорно-молибденовокислого аммония.

2. Фосфопротеиды

Фосфопротеиды – сложные белки, простетическая часть которых представлена фосфорной кислотой, эфирно присоединенной к белку через остатки оксиаминокислот (треонина, серина).

Представителем фосфопротеидов является казеин – белок молока.

При щелочном гидролизе эфирная связь легко разрушается и фосфопротеид распадается на белок и H₃PO₄.

Гидролиз казеина

Ход работы: В пробирку помещают несколько зернышек казеина и 8 капель 10% раствора NaOH. Кипятят 30 секунд, затем охлаждают пробирку и проводят реакции на продукты гидролиза.

Обнаружение белка (биуретовая реакция)

В пробирку помещают 2 капли гидролизата и добавляют каплю 1% раствора CuSO₄.

Молибденовая проба

Оставшийся гидролизат подкисляют 5 каплями кислоты, добавляют 5 капель молибденового реактива и нагревают до кипения. Жидкость окрашивается в желтый цвет, а затем выпадает желтый осадок фосфорномолибдата аммония, указывающий на присутствие в гидролизате H₃PO₄ (может появляться и сине-зеленое окрашивание).