17. Лабораторная работа

Подсчет количество лейкоцитов камерой Горяева

Лейкоциты – группа клеток крови выполняющие защитную функцию. Они могут мигрировать вне тока крови. Лейкопения ( уменьшение количества) происходит редко лейкоцитоз ( увеличение количества) наиболее частая реакция организма на отрицательные факторы внешней среды.

17.1 Цель работы: с помощью камеры Горяева определить количество лейкоцитов в 1 л крови.

17.2 Материалы и оборудование: животные, камеры Горяева, покровные стекла, микроскопы, иглы для взятия крови, смесители для лейкоцитов, 3% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовой синькой, вата, спирт этиловый.

17.3 Ход работы

В смеситель для лейкоцитов до метки 0,5 (или 1,0) набирают кровь и разбавляют ее, насасывая до метки 11 3% раствор уксусной кислоты (кровь разбавляется в 20 (или 10) раз). Уксусная кислота гемолизирует эритроциты, тогда как ядра лейкоцитов при такой обработке отчетливо выделяются. Зажав смеситель между большим и средним пальцами, встряхивают его в течение 1 минуты.

Рисунок 17.1 Смеситель крови для подсчета лейкоцитов: 1 - капилляр, 2 - ампула, 3 - наконечник.

Удаляют 1 - 2 капли из капилляра на фильтровальную бумагу и заполняют камеру Горяева, приложив смеситель с выступающей небольшой каплей к краю покровного стекла (над счетной сеткой). Помещают камеру на предметный столик микроскопа и подсчитывают количество лейкоцитов под малым увеличением в 100 больших (наделенных) квадратах.

Вычисление количества лейкоцитов производят по формуле:

где Х - искомое число лейкоцитов в 1 мм³ крови, А - число лейкоцитов в 100 больших квадратах, 20 (или 10) - степень разведения крови, 250 - фактор пересчета (объем над большим квадратом мм³).

Найденное количество лейкоцитов переводят в единицы СИ (Международная система единиц), т.е. на 1 л крови, умножая на 10⁶.

Записать результат, сравнить его с нормой и сделать выводы.

Контрольные вопросы.

1. Виды лейкоцитов.

2. Свойства лейкоцитов.

3. Количество лейкоцитов у различных видов животных.

4. Где образуются лейкоциты?

5. Основные функции лейкоцитов.

6. Функция различных форм лейкоцитов.

7. В чем противоположность функции эозинофилов и базофилов?

8. Каковы функциональные отличия моноцитов от лимфоцитов?

18 Лабораторная работа

Определение СОЭ прибором Панченкова и содержания

гемоглобина в крови по методу Сали

Скорость оседания эритроцитов прямо пропорциональна уровню электрического заряда на их поверхности, который коррелируется с функциональным состоянием организма.

Эритроциты обеспечивают транспорт газов белком гемоглобин. Содержание гемоглобина крови зависит от возраста, условий кормления и содержания, пола функционального состояния организма.

18.1 Цель работы: с помощью прибора Панченкова определить СОЭ за 1 час у разных видов животных. Колориметрическим методом определить количество гемоглобина и установить видовые отличия в его содержании.

18.2 Приборы и оборудование: животные, прибор Панченкова, часовое стекло, 5%-ный раствор щавелевокислого или лимоннокислого натрия, эфир, спирт этиловый, йод, вата, инструментарий для взятия крови, цитратная кровь иглы для взятия крови, гепарин, штатив с пробирками, мерные пипетки, гемометры Сали (ГС-3), пипетки глазные, соляная кислота 0,1 Н раствор, дистиллированная вода.

18.3. Ход работы

Капилляр промывают 5% раствором цитрата натрия. Затем набирают цитрат натрия до метки "Р" на уровне 50 мм и выдувают его в химический стаканчик. В тот же капилляр двукратно набирают кровь до метки "К".

При наборе крови капилляр держат горизонтально, погрузив его кончик в каплю крови, при этом кровь сама наполняет капилляр.

Обе порции крови выпускают в стаканчик, смешивая их с имеющимся там цитратом натрия. Полученную в стаканчике смесь крови с цитратом натрия в отношении 4:1 набирают в капилляр до метки "0" и ставят капилляр в штатив (рисунок 18.1). Через час смотрят, какова высота в миллиметрах образовавшегося верхнего столбика плазмы в капилляре. Его величина и является мерой СОЭ.

Рисунок 18.1 Прибор ПР-1 с капилляром Панченкова.

Визуальная колориметрия с помощью гемометра ГС-3.

В градуированную пробирку глазной пипеткой наливают 0,1Н раствор HCl до нижней кольцевой метки шкалы (0,2мл). В капиллярную пипетку насасывают кровь без пузырьков воздуха до метки 0,02 мл. Обтерев кончик пипетки снаружи ватой, опускают ее в пробирку с 0,1Н раствором HCl и осторожно выдувают кровь. Не извлекая капиллярную пипетку из пробирки, промывают капилляр 2 - 3 раза кислотой из верхнего слоя жидкости, не допуская появления пузырьков воздуха.

Рисунок 18.2 Гемометр ГС-3: 1 - корпус, 2 - запаянные пробирки со стандартом, 3 - градуированная пробирка, 4 - капиллярная пипетка для взятия крови, 5 - глазная пипетка, 6 - стеклянная палочка.

Пробирку встряхивают и ставят в штатив на 5 мин для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Через 5 мин глазной пипеткой добавляют по каплям Н2О, помешивая содержимое стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет жидкости не совпадет с окраской стандарта. Снимают показания гемометра в г % по нижнему мениску жидкости в градуированной пробирке. Для перевода грамм-процентов в единицы СИ полученный результат умножают на 10.

Записать полученные результаты, сравнить их с нормой и сделать выводы.

Контрольные вопросы

1. Какая в норме скорость оседания эритроцитов у домашних животных?

2. Перечислите факторы, оказывающие влияние на СОЭ.

3. Что такое гемоглобин? Где он образуется?

4. Назовите основные функции гемоглобина.

5. Количество гемоглобина у животных разных видов.

6. Перечислите основные методы определения количества гемоглобина.

7. При каких условиях образуется оксигемоглобин и восстановленный гемоглобин?

8. Какие соединения гемоглобина не способны выполнять функции по переносу кислорода?

9. В чем различие спектра поглощения оксигемоглобина и восстановленного гемоглобина?

10. Из какой части гемоглобина образуется билирубин?