Хід роботи.

1. У стерильних умовах, стерильними інструментами витягнути проростки з добре сформованим корінням з пробірок і перенести на поживні середовища для індукції бульбоутворення.

2. Пробірки з пересадженими в них рослинами закрити і перенести в культуральну кімнату.

3. Провести спостереження процесу бульбоутворення через 4-6-8 тижнів культивування.

4. Результати замалювати, зробити висновки на підставі теорії гормональної регуляції.

5. Закласти мікробульби на зберігання.

Робота 5. ІМУНОФЕРМЕНТНИЙ АНАЛІЗ. ТЕСТУВАННЯ

Рослинного матеріалу на вміст вірусів Теоретичні відомості

Принцип методу ІФА полягає в наступному: до одного з компонентів антиген-антитіло приєднують фермент, інший компонент сорбують на твердій фазі. Потім проводять реакцію нейтралізації, додають субстрат і визначають активність комплексу. Активність ферменту, тобто кількість комплексів, що утворилися, антиген-антитіло пропорційне змісту вірусів.

Для аналізу використовують полістеролові плата, в лунки яких додають сироватку і антитіла, отримані на основі тестованих вірусів з крові ссавців.

Антитіла адсорбуються на поверхні осередків плата протягом 6 годин. Залишки сироватки видаляють спеціальним буфером. Потім в лунки вносять досліджувальні витяжки рослин (сік листя, бульб). За наявності вірусного зараження утворюється комплекс вірус-антитіло. Обов'язково готують контрольні плата (без зараження). Після промивання буфером в осередки додають антитіла в комплексі з ферментами: фосфотазою і пероксидазою. У присутності вірусу на поверхні плата утворюється комплекс антиген-антитіло-фермент. Якщо матеріал стерильний, комплекси не утворюються, а залишки ферменту відмиваються буфером. Після усіх описаних вище маніпуляцій в лунки плата додають субстрат, на якому працює фермент (для фосфотази потрібні еритроцити крові, які руйнуються в її присутності).

В результаті реакції між ферментом і субстратом забарвлення розчинів в лунках плата змінюються залежно від міри зараження вірусом : немає забарвлення - "-" - вірус відсутній, світло-коричневе забарвлення - "+" - середнє зараження вірусом, яскраво-коричневе забарвлення -"++" - висока ступінь зараження вірусом.

Для успішного тестування вірусів необхідно створити стандартні умови, використовувати високоякісні антитіла, ферменти, плата.

Матеріали і устаткування. Полістеролові плата, рослинні екстракти, гомогенізатор, сироватки, розчини ферментів, кров ссавців, буферний розчин, центрифуга, рослинний матеріал.

Хід роботи.

1. Рослинний матеріал гомогенізують і центрифугують.

2. Заповнити сироваткою полістеролові плата і залишити для інкубації на 6 годин.

3. Промити плата буфером.

4. Внести до лунок плата центрифугат і залишити для інкубації на 1 годину.

5. Промити плата буфером.

6. Заповнити плата сироваткою з ферментом і залишити на 1 годину.

7. Промити плата буфером.

8. Внести до лунок субстрат для ферменту.

9. Протестувати зміну забарвлення в лунках плата за шкалою.

10. Відібрати зразки без вірусів, із слабкою мірою зараження і з сильним зараженням вірусом.

11. Результати тестування замалювати, зробити висновки про якість посадкового матеріалу.

Робота 6. ОТРИМАННЯ БЕЗВІРУСНОГО ПОСАДКОВОГО МАТЕРІАЛУ МЕТОДОМ ТЕРМОТЕРАПІЇ У ПОЄДНАННІ З КУЛЬТИВУВАННЯМ АПІКАЛЬНИХ МЕРИСТЕМ