3.Билет

1 Биологические методы. Применяют главным образом для определения некоторых пестицидов и микотоксинов. Они основаны на чувствительности низших животных, растений или тканей к действию токсического вещества. Так, к инсектицидам и акарици-дам наиболее чувствительны различные членистоногие. Чаще других для определения ансектоакарицидов используют комнатных мух, мух-дрозофил, личинок комаров и рачков-дафний. Для определения микотоксинов применяют кожные пробы на кроликах или аквариумных рыбах гуппи.

Некоторые из микотоксинов, в частности трихотецены и другие, продуцируемые грибом Fusarium sporotrihioides, обладают очень сильным дерматоцидным действием, поэтому реакция кожи является специфической по отношению к метаболитам этих видов грибов. Из всех позвоночных животных наиболее чувствительны по отношению к большинству токсических веществ рыбы, поэтому их используют для определения не только микотоксинов, но и многих других токсикантов. Биол методы индикации обладают высокой чувствительностью, однако в большинстве своем они неспецифичны и не позволяют установить вид токсического вещества. Однако эти методы широко применяют для общей токсикологической оценки кормов при отравлениях жив-х на первой стадии лаб. токсикологического исследования. С помощью этих методов можно установить отравление и исключить заболевания другой этиологии. 2 Г.формальдегиды-газообразное вещество с резким специфическим запахом, хорошо растворимое в воде. Для практических целей используется официнальный водный раствор формальдегида (формалин), который содержит От 36,5 до 37,5% формальдегида. Препарат оказывает очень сильное противомикробное действие как на вегетативные формы, так и на споры. Международное название метаналь, устаревшее — муравьиный альдегид. Формальдегид официально внесён в список канцерогенных веществ.( Формидрон,Мазь формалиновая Формалин,параформальдегид,лизоформ,уротропин).М.Д.антимикробное-прекращает рост бацилл, более стойких микробов, обеззараживает помещения. Противочесоточно-в форма линимента убивает чесоточных клещей. При контакте со слизистыми оболочками, кожей и раневой поверхностью формальдегид оказывает вяжущее, а затем раздражающее действие. вызывает уплотнение кожи и слизистых оболочек. Воздействие препарата на кожу сопровождается также повреждением потовых желез, что приводит к уменьшению потливости кожи.ПРИМНЕНИЕ-1.для дезинфекции помещений,спец одежды;2.противочесоточно при ограниченных участках поражения; 3.противоэкзематозное средство, прменяют спиртовый раствор; 4.противовоспалительное сред.-при гнойном коньюктивите; 5. дизенфицирующе и противобродильно; 6.для консервирования пат-анатом. препаратов. 3 РТУТЬ-На беззольную фильтровальную бумагу наносят каплю взвеси меди иодида, добавляют 40мл. 10% раствора меди сульфата, образованный осадок фильтруют, промывают до полного обесцвечивания и смывают водой в мерную колбу. Через 2-3 мин.на то же место наносят каплю минерализата.при наличии ртути проявляется красное или красно-оранжевое пятно. Реакция высокочувствительная, позволяет обнаружить0,25мкг ртути в одной капле.

4билет

.1 Химические методы. Основаны на количественном определении осадка или окрашенного комплекса, образуемого при взаимодействии открываемого вещества с другим химическим соединением. Химические методы анализа, применяемые в ветеринарной токсикологической практике, основаны на осаждении, титрометрии, колориметрии, спектрофотометрии.

Реакция осаждения базируется на образовании нерастворимого в воде осадка при взаимодействии открываемого химического вещества с другим химическими соединением, вводимым в экстракт. По реакции осаждения определяют некоторые алкалоиды, натрия хлорид, ТМТД и другие токсические вещества. Однако методы определения ядовитых веществ этой реакцией имеют низкую чувствительность, недостаточную специфичность и точность, поэтому их применяют ограниченно.Более широко используют титрометрические методы. Примером может служить определение натрия хлорида при осаждении хлоридов серебра нитратом с последующим титрованием избытка серебра роданидом аммония в присутствии в качестве индикатора железоаммонийных квасцов. Но и титрометрические методы недостаточно чувствительны и утрачивают свое практическое значение в связи с развитием новых, более совершенных способов.

В практике химико-токсикологических исследований находят широкое применение колориметрические методы, основанные на определении интенсивности окраски цветных комплексов, образующихся при взаимодействии открываемого вещества с другим химическим соединением, вводимым в раствор. В последние годы. все чаще используют фотоэлектро колориметрические методы, при которых интенсивность окрашивания цветных комплексов определяют с помощью фотоэлектроколориметра. По чувствительности и точности колориметрические методы превосходят основанные на осаждении и титрометрии способы.2 тетрациклины- група антибиотиков, относится к классу поликетидов.желтый кристалл.ве-во,устойчивое в твердом состоянии,обладает амфотерным свойством,способны образовывать соли с органическими и неорганическими кислотами, щелочными металлами.образуется нерастворимый комплекс с борной кислотой.хорошо растворимы в пиридине, кислотах и щелочах, плохо растворимы в воде, органических растворителях. М.Д. подавляют белковый синтез. Действуют на грамм+ и грамм- бактерии, крупные вирусы, спирохеты, риккетсии, лептоспиры и некоторые простейшие. Они хорошо всасываются и равномерно распределяются в организме, выделяются больше через почки, поэтому эффективны при инфекционных заболеваниях мочевыводящих путей. Лечебная концентрация их удерживается после орального применения в течение 8- 10 ч, а внутримышечного - 14-16 ч. Применение- при тяжелых инфекционных болезнях. Назначают при септических процессах (гнойный плеврит, перитонит), при инфекционных заболеваниях органов дыхания (пневмония, бронхопневмония, абсцесс легких), почек и мочевыводящих путей. Применяют наружно при воспалении слизистых оболочек глаз, полости рта и носа, а также при гнойных ранах кожи в виде раствора или мази 1-3%-ной концентрации. Препараты -относятся хлортетрациклин, окситетрациклин и тетрациклин, Дибиомицин, дитетрациклин. Полусинтетические тетрациклины-Доксициклин, метациклина гидрохлорид 3 медь- 2-3капи минерализата нейтрализуют концентрированным аммиаком, после каплю раствора наносят на фильтров.бумагу, пропитанной раствором кремнекислого натрия и высушить. держат на склянкой с аммиаком, высушивают и опрыскивают раствором рубиановодородной кислотой.в присутствии меди пятно окраш. в темно-зеленый цвет. при сомнительной реакции берут минерализат 3-5 мл, выпаривают в формалиновой чашке с добавлением пергидроля.

5билет

1 Методы определения токсических вещ-в в объектах окруж среды, тканях жив-х и продуктах Физико-химические методы. К физико-химическим методам относят различные методы хроматографии (колоночную, бумажную, тонкослойную, газожидкостную и жидкостную), полярографию, ультрафиолетовую и инфракрасную спектрометрию, атомную абсорбцию, методы нейтронно-активационного анализа. Из хроматографических методов в практике ветеринарно-ток-сикологического исследования наибольшее применение находят тонкослойная и газожидкостная хроматографии (ТСХ и ГЖХ.Тонкослойную хроматографию Наиболее широко применяют в практических лабораториях. Принцип полуколичественного метода состоит в том, что смесь химических веществ, содержащихся в анализируемой пробе, наносят на пластинку и разделяют в тонком слое инертного порошка (селикагель, окись алюминия и др.) с помощью смеси органических растворителей (подвижный растворитель). Пластинку опрыскивают раствором проявляющего реактива, в результате чего на ней появляются в виде окрашенных пятен исследуемые хим соединения. Идентифицируют открытые вещества по величине Rf — частному от деления расстояния, пройденного искомым веществом от точки нанесения (линия старта) до места дислокации, к расстоянию, пройденному подвижным растворителем. Кол-во открываемого вещества определяют по интенсивности окраски пятна и его размерам. Газовую хроматографию Применяют для одновременного разделения смеси химических веществ, их последующей идентификации и количественного определения. Разделение смеси осуществляют на стеклянных или металлических колонках длиной 1—Зм, заполненных твердым адсорбентом с нанесенной на него жидкой фазой. В качестве последней чаще всего используют высокомолекулярные жидкости с высокой температурой кипения (полиэти-ленгликоли, силиконовые масла и др.). Подвижной фазой служит инертный газ (азот и др.).Индикацию разделенных химических веществ осуществляют с помощью детектора. В газовых хроматографах, предназначенных для анализа токсических веществ, чаще всего используют детектор электронного захвата (ДЭЗ), термоионный детектор (ТИД), пламенно-фотометрический детектор (ПФД). Абсолютная чувствительность детектирования различных химических соединений достигает 0,01—0,02 нг в пробе, относительная чувствительность-0,1—0,5мкг/кг. В практике химико-токсикологического анализа газовую хроматографию применяют для открытия многих пестицидов, органических соединений ртути, полихлорированных би-фенилов и других токсических соединений. Однако возможности газовой хроматографии далеко не исчерпаны. Газовая хроматография, и в частности ГЖХ, имеет некоторые недостатки: не позволяет прямым способом разделить и идентифицировать вещества, не обладающие летучестью и не способные прямым путем переходить в газообразное состояние.

2 АРОМАТИЧЕСКИЙ РЯД-

3 БАРИЙ-3-5 капель минерализата нейтрализуют концентрованым аммиаком.каплю наносят на фильтровальн.бумагу пропитанную 4% раствором виннокислого натрия, подсушивают на воздухе и опрыскивают раствором натрия родизоната, а затем буферным раствором рН-2,8.смешивают с лимонной кислотой.при наличии бария проявляется оранжево-красное пятно,которое исчезает при нанесения капли 10% раствора натрия сульфата.

6билет

6.1Эмбриотоксическое действие. Это способность исследуемого вещества отрицательно действовать на развивающиеся эмбрионы. В медицинской токсикологии эмбриотоксиче­ское действие изучают на самках белых крыс, которым в течение всей беременности вво­дят внутрь через зонд или дают с кормом препарат. На 17-19-й день беременности, крыс убивают, подсчитывают число плодовместилищ, желтых тел в яичниках, живых и мерт­вых плодов. Сравнивая результаты этих исследований в опытной и контрольной группах, устанавливают степень эмбриотоксической активности препарата. Часть беременных крыс из опытных групп оставляют для родов, при этом учитывают продолжительность беременности, число плодов, их массу, длину туловища новорожденных крысят, их разви­тие. Кроме того, учитывают выживаемость крысят, распределение их по полу. При этом отмечают: избирательную эмбриотоксичность - эффект проявляется в дозах, не токсич­ных для материнского организма; общую эмбриотоксичность - проявляется одновременно с развитием интоксикации организма матери; отсутствие эмбриотоксичности - эффект не отмечается при признаках интоксикации материнского организма 6.2 аминогликозиды-група антибиотиков,общим в химич.строении которых является наличие в молекуле аминосахара, соедин аминогликозидной связью с аминоциклическим кольцом. М.Д. угнетают синтеза белка. оказывают бактерицидное действие. нарушают рибосомальный белковый синтез. в норме плохо всасываются в просвете кишечника и действуют только местно. Применение-при желудочно-кишечных заболеваниях (диспепсии, гастроэнтеритах) и при болезнях органов дыхания (бронхопенвмонии, пневмонии, бронхите). Назначают при различных гнойно-септических заболеваниях, при плеврите, перитоните, эндометритах, маститах, вызванных чувствительной к неомицину микрофлорой. Местно применяют для лечения инфицированных ран, гнойных поражений кожи и слизистых оболочек рта, носа и глаз. Вводят при операциях на ЖКТ для подавления микрофлоры кишечника. Местно применяют в виде орошения и промывания водным раствором. Внутрь назначают в виде растворов. ПРЕПАРАТЫ- Выделяют I поколения - канамицин, мономицин, неомицин, стрептомицин; гентамицин относится ко II поколению. 3. Тонкослойная хроматография В основе метода лежит разделение ядовитых веществ (хроматография), выполняемое на слое адсорбента, который нанесен на подложку (стеклянную пластинкуОсновные этапы включают экстракцию (извлечение) ядовитых веществ из корма и патматериала, очистку экстрактов от посторонних примесей, концентрирование их, разделение на пластинке, проявление и количественное определение.Экстракция - это процесс переноса растворенного вещества из одной жидкой фазы в другую (несмешивающуюся с ней). В качестве экстрагирующе­го растворителя берут обычно органические вещества, в которых хорошо рас­творяется яд. Например, для экстракции ХОС используют ацетон, н-гексан, петролейный эфир, бензол, хлороформ или их смееи; для ФОС - спирты, хло­роформ, этилацетат.Берут навеску измельченного объекта заливают растворителем и проводят экстракцию в аппарате Соксклета, при помощи смесителей, в шуттель-аппарате или путем простого настаивания в течение 12-14 ч.Очистку экстрактов проводят методом омыления, сульфинирования, распределения между двумя несмешивающимися жидкостями, осаждения жи­ров, восков и белков, колоночной хроматографии. Точность исследования за­висит от правильно подобранного в каждом конкретном случае метода очист­ки экстрактов. Омыление применяют при определении устойчивых к щелочному гидро­лизу препаратов. Например, нельзя омылять ГХЦГ, ДДТ, производные моче­вины, некоторые ФОС. Сульфинирование осуществляется в делительной воронке, где н-гексановый экстракт осторожно встряхивают с концентрированной серной ки­слотой или насыщенным раствором безводного сульфата натрия в концентри­рованной серной кислоте. Органический слой обрабатывают до тех пор пока раствор сульфата натрия в серной кислоте не будет бесцветным. Метод распределения между двумя несмешивающимися жидкостями ос­нован на различии коэффициентов распределения ядовитых веществ и сопут ствуюших веществ между двумя несмешивающимися растворителями. С этой целью обычно берут н-гексан и диметилформамид или ацетонитрил. Ход анализа На стартовую линию пластинки (1,5 см от края) наносят в виде точек анализируемые пробы и известные количества стандартных рас­творов предполагаемых ядовитых веществ при помощи шприца на 1 мл, мик­ропипетки или специального микрометрического шприца. Размер пятна на слое сорбента в диаметре не должен превышать 1 см.За 1 ч до анализа в хроматографическую камеру заливают подвижный растворитель, уровень которого не должен превышать 0,5 см. помещают пла­стинки в растворитель и закрывают плотно камеру. После поднятия раствори­теля по сорбенту на высоту 10 см пластинки вынимают, отмечают верхнюю границу подъема растворителя (линию фронта), высушивают на воздухе и об­рабатывают проявляющим реагентом.

7билет

1 Тератогенное действие. Это такое действие, при котором нарушается формирование плода в период его эмбрионального развития. Проявляется оно в виде уродства. В медицинской токсикологии и тератогенное действие пестицидов определяют на бе­лых крысах. Для этого препарат животным вводят внутрь через 1 день в течение всей бе­ременности. Часть животных опытных групп убивают на 17-20-й день беременности, часть оставляют до родов. При вскрытии убитых крыс определяют среднее число желтых тел на одну самку, нормально и ненормально развивающихся зародышей. Тератогенное действие препаратов на сель/хоз животных не изучают. При проявлении тератогенного эффекта возможны следующие уродства: отсутствие головного мозга (анэнцефалия) недоразвитие головного мозга (микроцефалия); повышен­ное содержание цереброспинальной жидкости в желудочках головного мозга (гидроцефа­лия); мозговая грыжа (энцефалоцелия); расщепление первых дужек позвонков (спина би-фида). Кроме того возможны: отсутствие глаз, заячья губа, волчья пасть, отсутствие ко­нечностей и др. 2 Макролиды- группа антибиотиков, содержащих в молекуле макроциклическое лактонное кольцо, связанное с одним или несколькими углеводными остатками. М.Д.- обладают бактериостатическим действием, высоких концентрациях могут приводить к гибели чувствительных клеток. макролиды активны против и бактерий (в основном грамположительных), а также возбудителей расположенных внутриклеточно. подавляют синтез белка микробной клетки. бактериостатического типа действия. Применение- Применяют при болезнях, вызываемых стафилококками, стрептококками и пневмококками, устойчивыми к пенициллину. Назначают при роже свиней, пастереллезе. Во всех случаях вводят внутримышечно в виде спирто-водных растворов. Препараты -спирамицин, эритромицин, полусинтетические макролиды- рокситромицин, азитромицин. 3. Обнаружение фторидов и кремнефторидов Реакция травления стекла. Исследуемый патматериал измельчают, по­мещают в тигель, подщелачивают едкой известью, добавляют раствор аммония нитрата, высушивают и прокаливают при температуре около 500 °С до пол­ного сжигания. После этого часть золы в тигле (свинцовом) смачивают не­сколькими каплями воды и обливают концентрированной серной кислотой. Ти­гель быстро закрывают часовым стеклом нижняя поверхность которого покрыта воском или парафином, на котором предварительно делают надпись или знак. Тигель оставляют на 24 часа, снимают слой парафина и наблюдают реакцию травления стекла. Чувствительность 2-3 мг фтора в пробе. Реакция желатинирования кати воды. В пробирку помещают 0,1-0,2 гр исследуемой соли удобрения и приливают несколько капель концентриро­ванной серной кислоты. В отверстие пробирки помещают стеклянную палочку с каплей воды. Если при этом капля мутнеет и желатинируется, то препарат пред­ставляет кремфторид. В присутствии фтористого натрия и других соединений фтора капля воды желатинируется лишь при нагревании пробирки. 3. Реакция с калия хлоридам. В пробирку с насыщенным водным раство­ром фтора содержащего препарата добавить несколько капель 10%-го раствора калия хлорида. В присутствии ионов фтора осадка не образуется, тогда как в присутствии иона кремнефтористого натрия выпадает студневидный осадок. 4. Реакция с роданидом железа В пробирку помещают 1-2 мл исследуе­мого водного раствора роданида аммония, смешивают, затем по каплям добав­ляют 3%-ного раствора хлорногожелеза. Быстрое исчезновение красно-коричневого окрашивания говорит о присутствии в растворе иона фтора. 5. Ализаринцирконевая проба Основа на том, что в солянокислом раство­ре соли циркония окрашиваются ализаринсульфонофокислым натрием в крас­но- фиолетовый цвет. При взаимодействии фтористых солей красно-фиолетовая окраска переходит в желтый цвет - образуется устойчивое комплексное соеди­нения фтористого циркония. Проведению реакции мешают оксалаты, фосфаты, сульфаты, дающие комплексные соединения с цирконием.Для исследования в химический стаканчик помещают 5-10 гр патологиче­ского материал, заливают его 10-20 мл 5%-ного раствора соляной кислоты, пе­ремешивают в течение 30 минут и фильтруют в пробирку, в которую предвари­тельно помещают 0,2-0,3 гр активированного угля. Пробирку с фильтратом взбалтывают 1-2 минуты и снова фильтруют. Фильтрат должен быть бесцвет­ным, в противном случае обработку углем повторяют. К полученному фильтрату по каплям при встряхивании прибавляют цир-конализариновый лак, окрашивающий фильтрат в красный цвет. При наличии фтора филтрат обесцвечивается и становится желтым. При отсутствии фтора фильтрат остается красно- фиолетового цвета.

8Билет

1.Гонадотоксическое действие токсических в-в. Опыт проводят на белых мышах.берут женские и мужские особи. На мужских особях проводят опыт на подвижность, морфологию,резистентность спермиев и сперматогенез. На женских особях проводят опыт на экстральный цикл и овогенез. 2.вещ-ва отдел. кислород. действе.применение.препараты.

3.количественое определение фторидов.опред.фтора в мышцах. Реакция основана на обесцвечивании розового цирконализаринового лака ионами фтора вследствие образования прочного комплексного соединения. окраска зависит от содержания фтора и может изменятся от розовой до желтой. Для определения фтора в пробирку наливают 1мл исследуемого фильтрата и добавляют 1мл рабочего раствора ализаринциркониевого лака, перемешивают и доводят дважды дистилиров.водой до объема 16мл и оставляют на 2часа.после этого производят колориметрирование при этом смотрят на белом фоне сверху вниз. Затем производят расчет на весь исслед.объект. Опред.фтора в мышцах.реакция основана на том, что в присутствии фтористого натрия животная мышца способна разрушать глюкозу с образованием ацетона. Берут 20-25 гр мышц от павшего или вынужденного убитого животного помещают в химич.стаканчик и добавляют 30-50 мл 5%раст-ра глюкозы выдерживают в течение 12ч.при комнат.температ, периодически помешивая стеклян. палочкой содержимое стаканчика. После этого фильтруют, берут 5мл полученного фильтрата и подщелачивают 2-3 каплями аммиака и добавляют 1-2 капли свежеприготовленного крепкого водного раст-ра нитропруссида натрия. При наличии ацетона появляется фиолетовое окрашивание. Фтор блокирует гликозид, инактивируя фермен энолазу,что ведет к накоплению диоксиацетона,к оторый дает реакцию с нитропруссидом.

9билет

1Мутагенное действие токсических в-в. Некоторые хим.в-ва нарушают передачу генетической информации, вследствие чего возможно появление мутантов-особей с признаками,не свойственными данному виду. Поэтому изучение мутагенных св-в пестицидов и других хим.в-в один из необходимых этапов токсикологического исследования. в ряде стран с этой целью используются скрининговый тест тест Эймса. В качестве тест организма используются отдельные штаммы бактерий группы сальмонелл, высокочувствительных к химическим мутантам. При наличии потенциальной мутагенности у исследуемого химич. вещ-ва происходит расщепление генов и резко возрастает количество колоний на плотной питательной среде. Однако мутагенность хим.в-ва,выявленная с помощью этого теста,не может быть признана абсолютной. во многих случаях под действием ферментных систем химическое вещ-во может быть детоксицировано, прежде чем оно достигает мишени. 2.органические краски.действие.применение. препараты. Группа красок Органические краски давно были известны как антимикробные ве­щества протозойных заболеваниях. Краски широко используют в качестве антипротозойных средств, а также противомикробных и противовоспалительных.В основе химиотерапевтического и химиопрофилактического влия­ния лежит действие на возбудителя непосредственно и через организм животного. Влияние на возбудителя болезни бывает тем эффективнее, чем раньше от начала болезни применен препарат, а также тогда, ког­да четко преобладают и соблюдаются все другие условия, повышающие лечебный эффект (доза препарата, кратность применения и др.)- Все химиотерапевтические краски рекомендуют в дозах, близких к токсиче­ским, поэтому одновременно с ними назначают препараты патогенети­ческого влияния в отношении центральной и сердечно-сосудистой си­стемы, обмена веществ и др. Механизм действия большинства препаратов на возбудителя пока еще точно не установлен. Но важное значение имеет подавление разви­тия возбудителя, нарушение или ослабление у него синтеза витаминов, ДНК, РНК и белка, ослабление реакций сульфгидрильных групп энзи­мов или нарушение функции клеточных мембран и др.; Препараты:флавакрадина гидрохлорид, азидин. этакридина лактат,бигумаль 3.Ферментный метод определения ФОС. Принцип метода основан на определении интенсивности угнетения активности ацетилхолино эстеразы при инкубации нормальной сыворотки крови лошади, экстракта из патматериала и раствора ацетилхолинхлорида степень угнетения фермента устанавливают по изменению окраски бромтимолового синего под воздействием образующейся уксусной кислоты от синей до зеленовато-желтоЙ.