Вопросы для подготовки

1. Общий план строения иммуноглобулина. Константные и вариабельные домены иммуноглобулинов. Изотипы иммуноглобулинов. Понятие об аллотипах и идиотипах.

2. Строение вариабельных доменов иммуноглобулинов. Гипервариабельные участки. Структура антигенсвязывающих участков.

3. Физические силы, участвующие во взаимодействии антигена с антителом. Аффинность взаимодействия антигена и антитела.

4. Иммуноглобулины классов (G, M, А, D и E), особенности строения и биологические функции.

5. Секреторный IgA. Синтез и роль в защите слизистых оболочек.

6. Эффекторные функции антител. Нейтрализация, опсонизация, комплементзависимый цитолиз. Значение изотипов антител.

7. Гибридомы и моноклональные антитела. Области применения.

8. Кинетика синтеза антител. Первичный и вторичный иммунный ответ. Механизм переключения изотипов антител при иммунном ответе.

9. Методы количественного определения иммуноглобулинов (радиальная иммунодиффузия по Манчини).

Задания для подготовки

1. Схематично нарисовать в тетради структуру молекулы IgG, подписать все фрагменты, цепи и домены.

2. Заполнить таблицу «Классы иммуноглобулинов»:

Класс Ig	Строение	Свойства
IgМ
IgG
IgA
IgE
IgD

Теоретическая справка

Определение иммунного статуса

Иммунный статус определяется совокупностью показателей специфических и неспецифических факторов защиты и характеризует индивидуальную иммунореактивность организма. Оценка иммунного статуса имеет значение для:

• выявления иммунологической недостаточности (иммунодефицита) и других патологических нарушений работы иммунной системы;

• наблюдения за эффективностью иммунодепрессивной или иммуностимулирующей терапии;

• определения показаний и выбора терапевтических препаратов.

Исследование иммунного статуса включает проведение тестов 1 и 2 уровней.

Тесты 1-го уровня (ориентирующие):

1. Определение факторов естественной резистентности (БАС, лизоцим, комплемент и др.).

2. Подсчет абсолютного и относительного числа лимфоцитов в периферической крови.

3. Подсчет числа Т- и В-лимфоцитов.

4. Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов.

5. Определение концентрации разных классов иммуноглобулинов.

Тесты 2-го уровня (аналитические):

1. Определение субпопуляции Т-лимфоцитов.

2. Определение функциональной активности Т- и В-лимфоцитов (Рис. 4.14).

3. Определение медиаторов иммунной системы.

4. Тесты на ГЧЗТ.

Практическая работа

Р а б о т а №1

Цель: Овладеть методикой определения иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии по Манчини

Задание. Определить уровни иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови обследуемых А. и В. методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Оформить протокол в виде рисунка с обозначениями и графика. Сделать заключение.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Три порции расплавленного 3%-ного агара смешивают в соотношении 1:1 соответственно с антиглобулиновыми сыворотками против IgM, IgG и IgА. Этими смесями покрывают три стеклянные пластины. В застывшем агаре каждой пластины делают лунки, в которые вносят по 0,2 мкл стандартной сыворотки с известным содержанием иммуноглобулинов трех классов (М, G и А): неразведенной, и в разведениях 1:2, 1:4, 1:6 и 1:8. В другие лунки каждой пластины вносят испытуемые сыворотки, взятые от обследуемых людей, в которых хотят определить содержание IgM, IgG и IgА. После суточного выдерживания во влажной камере при 4°С измеряют диаметры образовавшихся колец преципитации с разведениями стандартной сыворотки на каждой из трех пластин и строят калибровочные кривые, отражающие концентрацию IgM, IgG и IgА в этой сыворотке (d_зоны=f(СIg)). Затем измеряют диаметры колец с исследуемой сывороткой (на трех пластинах) и по калибровочным кривым определяют концентрацию IgM, IgG и IgА в сыворотках обследуемых.

Исходный уровень содержания иммуноглобулинов в стандартной сыворотке:

IgG– 8,41 мг/мл (133 МЕ/мл)

IgM– 1,12 мг/мл (109 МЕ/мл)

IgA– 1,55 мг/мл (104 МЕ/мл)

Протокол

Цель:

Результаты определения иммуноглобулинов в исследуемой сыворотке

Иммуноглобулин	Калибровочный график	Содержание в исследуемой сыворотке, мг/мл	Радиальная иммунодифузия по Манчини
IgG			Рис. с обозначениями
IgM
IgA

Вывод:(Ответить на вопросы: 1. Соответствуют ли содержание иммуноглобулинов в сыворотке норме? 2. Что может быть причиной изменения содержания иммуноглобулинов?)

занятие №6:	Главный комплекс гистосовместимости НLA-типирование
УЧЕБНАЯ Цель:	1. Изучить строение и роль HLA-системы во врожденном и адаптивном иммунитете 2. Познакомиться с методом HLA-типирования.