7 Хроматография на бумаге

Хроматография на бумаге по механизму разделения является распреде­лительной. Метод основан на различии в коэффициентах распределения между двумя несмешивающими фазами. Неподвижная фаза в этом случае удерживается в порах специальной хроматографической бумаги, которая служит носителем. ПФ продвигается вдоль листа бумаги, главным образом благодаря капиллярным силам. Как и в случае ТСХ, для количественной оценки подвижности веществ используется параметр R_f, равный отношению скорости движения зоны определенного компонента к скорости движения фронта подвижной фазы. На подвижность веществ в условиях хроматогра­фии на бумаге влияет не только коэффициент распределения, но и взаимодействие их с волокнами, условия проведения эксперимента и характеристика бумаги. Методика хроматографирования на бумаге анало­гична ТСХ.

Хроматографическая бумага должна быть чистой, однородной по плот­ности, структуре и ориентации волокон. В простых случаях используют плотные сорта фильтровальной бумаги. Обычная бумага гидрофильна и содержит до 20 % влаги, что является вполне достаточным количеством в том случае, когда НФ служит вода, а ПФ - несмешивающийся с водой органический растворитель. Если же бумагу предварительно пропитать гидрофобными веществами или подвергнуть специальной химической обра­ботке для устранения гидроксильных групп целлюлозы, то можно реализо­вать обращенно-фазовый вариант бумажной хроматографии. ПФ в обращен­но-фазовом варианте служат вода и смеси воды с полярными органически­ми растворителями.

В хроматографии на бумаге, как и в других видах хроматографии, большое значение имеет правильный выбор ПФ и НФ. Эти фазы не должны смешиваться друг с другом. Анализируемые вещества должны растворяться в НФ лучше, чем в ПФ, иначе они будут двигаться со скоростью движения фронта элюента.

Одним из преимуществ бумажной хроматографии является ее чувстви­тельность; бумажную хроматографию широко применяют в качественном анализе, а также для количественного определения компонентов смеси после их разделения. Количественный анализ в хроматографии на бумаге также аналогичен методам, применяемым в ТСХ.

8 Измерение концентрации при помощи хроматографических методов

Измерение концентрации при помощи современных хроматографов осно­вано на пропорциональности между количеством вещества в зоне и высотой или площадью хроматографического пика.

Для вычисления концентрации вещества в пробе можно использовать несколько методов. Наиболее распространены методы абсолютной калиб­ровки и внутреннего стандарта.

В методе абсолютной калибровки в идентичных условиях получают хроматографические пики анализируемого раствора и стандартных растворов известной концентрации. Строят график зависи­мости высоты или площади пика от количества введенного стандарта. Получив пик определяемого вещества, на основании градуировочного графика находят концентрацию вещества в анализируемом растворе. В качестве стандарта можно применять любое чистое вещество, которое хорошо хроматографируется в условиях анализа. В этом случае предвари­тельно определяют соотношение между откликами стандарта и соединений, концентрация которых определяется. Под откликом понимают сигнал детектора, соответствующий известному количеству анализируемого ве­щества.

В методе внутреннего стандарта к анализируемо­му раствору добавляют известное количество стандарта. Стандарт должен давать пик, хорошо отделенный от пиков определяемого вещества и остальных компонентов пробы. После предварительного определения со­отношения между откликами стандарта и определяемого вещества на хроматограмме анализируемого раствора измеряют соотношение площадей пиков определяемого вещества и стандарта. Зная концентрацию стандар­та, соотношение пиков и откликов стандарта и анализируемого компонен­та, вычисляют его концентрацию в растворе. Преимущество этого метода состоит в том, что в данном случае нет необходимости в точной дозировке пробы.

21