Серологические исследования

Предложено большое количество различных реакций, выявляющих Аг микобактерий и AT к ним, например РСК, РА, РПГА по Бойдену, агрегатагглютинации и др.; однако они либо не обладают необходимой специфичностью, либо требуют дифференциальной диагностики при получении ложноположительных реакций с Аг и AT к другим микобактериям.

Кожные пробы с туберкулином

Имеют особую значимость, т.к. позволяют проводить широкомасштабные скрининговые обследования населения; метод включает внесение небольших доз ППД-Л (новый туберкулин Коха) в кожные насечки (реакция Пирке), внутрикожно (реакция Манту) и подкожно (реакция Коха). При положительном результате через 48 ч в месте введения формируется папула диаметром 10 мм с гиперемированными краями.

Таблица 1. Основные дифференциально-диагностические морфологические и ростовые характеристики микобактерий

Вид	Колонии		Рост
	Морфология	Пигмент*	Скорость**	Температура
М. tuberculosis	R-колонии	Н (кремовые)	Медленная	31-37
М. bovis	Мелкие, прозрачные R-колонии	Н (бесцветные или кремовые)	Медленная	37
М. africanum	R-колонии	Н	Медленная	37
М. aviumintracellulare	Мелкие, выпуклые, мутные S-колонии, реже R-диссоциаты	Н (иногда окрашены)	Медленная (более 8 нед)	37 (оптимум): растет от 25 до 45
М. scrofulaceum	Круглые S-колонии	С (желто-оранжевые)	Медленная	25-37
М. kansasii	R-колонии, содержат кристаллы b-каротина	Ф (редко Н или С)	Медленная	25-37
М. fortuitumcheloneae	S- и R-колонии	Н(кремовые)	Быстрая	25-40
М. xenopi	S-колонии с выростами	Н(С)	Медленная	42-43 (оптимум)
М. szulgai	S- и R-колонии	С (37°С); Ф(25°С)	Медленная	25-37
М. malmoense	S-колонии	Бесцветные	Умеренная	25-37
M. simiae	S-колонии	Ф (при дли­ тельной экспозиции)	Медленная	37
М. marinum	Неровные, блестящие S-колонии; реже R-диссоциаты	Ф	Умеренная	31-33 (оптимум)
М. haemophilum	R-колонии; реже S-диссоциаты	Н	Медленная	20-32 (оптимум)
М. gordonae	S-колонии	С, оранжевые	Медленная	25-37
М. asiaticum	?	Ф	Медленная	25-37
М. thermoresistible	Чаще S-колонии; реже R-диссоциаты	Ф (желто-оран­жевые, позднее коричневые)	Быстрая	37-45 (оптимум)
М. terratriviale	S- (М. terra) и R- (М. triviale) колонии	Н	Медленная	25-37
М. nonchromogenicum	R-колонии	Н	Медленная	25-37
М. flavescens	S-колонии	С	Умеренная	25-37
М. smegmatis	ЧащеR-колонии; реже S-диссоциаты	Н (кремовые)	Быстрая	25-45
М. shimoidei	R-колонии	Н	Медленная	37

^* Н — нефотохромогенные; С — скотохромогенные; Ф — фотохромогенные.

^** Скорость роста на твердых средах: медленная — рост в течение 4-6 недель; умеренная — рост в течение 2-3 недель; быстрая — в течение 5-7 суток.

Рисунок 10. Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителей туберкулеза

Mycobacterium bovis

Возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота, вызывает 5% случаев туберкулеза у человека. Морфологические отличия от Mycobacterium tuberculosis не выражены, микобактерии бычьего типа несколько короче, с менее выраженной склонностью к ветвлению. Культуральные свойства также сходны; однако на искусственных средах растут медленно и только при температуре 37°С, в глицерине не нуждаются. В первичных культурах и на средах, не содержащих пируват, отмечают скудный рост; колонии мелкие, плоские, шероховатые. Принципы выделения аналогичны таковым для микобактерий человеческого типа (рис. 21). Основными методами дифференциальной диагностики с Mycobacterium tuberculosis считают ниациновый тест и биологическую пробу на кроликах (кролики резистентны к заражению М. tuberculosis). Возбудитель — рекордсмен по числу возможных хозяев и выявлен у 60 видов млекопитающих, но эпидемическую опасность для человека представляют крупный рогатый скот (наибольшее значение), верблюды, козы, овцы, свиньи, собаки и кошки. Больные животные выделяют микобактерии с молоком, мокротой, мочой и калом: человек заражается при контактах с больным животным или при употреблении сырого молока, или (реже) плохо обработанного мяса. В сливочном масле возбудитель может сохраняться до 240 суток, в сыре — до 200 суток.

Мycobacterium avium

Возбудитель туберкулеза птиц. Бактериальные клетки тонкие, от коротких до длинных, иногда ветвятся. Оптимум температуры 38-41°С, рН 6,8-7,3. На питательных средах растет быстрее (10-20 дней), чем М. bovis и M. tuberculosis.

На плотных яичных средах растет в виде гладкого маслянистого налета. Колонии округлые, слизистые, мягкие, серовато-белые, с возрастом могут желтеть. Могут иметь пуговицеобразное возвышение с кратерообразным углублением. При первичной изоляции из патологического материала колонии плоские и полупрозрачные. Бактериальная масса легко суспендируется в физиологическом растворе. В жидких питательных средах возбудитель дает диффузный рост, на поверхности формируется влажная жирная пленка, на дне рыхлый осадок. Вид антигенно неоднороден. Дифференцируют три серовара. Серовар 2 отличается большой патогенностью для кур.

Кроме больных птиц, может быть изолирован из лимфатических узлов и пораженных тканей крупного рогатого скота, свиней и других животных. В эксперименте при внутривенном заражении кур обусловливает заболевание с летальным исходом в течение месяца, реже позднее. На вскрытии у павших кур обнаруживают очаги в печени и селезенке. У зараженных внутривенно кроликов развивается септический процесс, и они гибнут на 11-30-е сутки. После подкожного заражения у морских свинок наблюдают изменения (абсцесс) на месте инъекции.

В соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (1986) бактериологическое исследование предусматривает микроскопическое исследование препаратов, окрашенных по методу Циля-Нельсена, люминесцентную микроскопию, выделение культуры посевом материала на стерильные питательные среды (Петраньяни, Гельберга, Левенштейна-Иенсена). Выделенные культуры идентифицируют с учетом скорости появления первичного роста, культурально-морфологических и тинкториальных свойств, способности к росту при различных температурных режимах (20-25, 37-38, 45°С) на разных питательных средах (яичные, яичные с салицилатом натрия, МПБ). Проводят биопробу с целью обнаружения возбудителя в испытуемом материале или определения видовой принадлежности выделенной культуры микобактерий. Вид подопытного животного определяется целью исследования (морские свинки, куры, кролики).

Мycobacterium paratuberculosis

Возбудитель паратуберкулеза. Болеют крупный рогатый скот, овцы, козы и другие виды домашних и диких животных. Клетки палочковидной формы, размером 0,6-2,0 ´ 0,2-0,5 мкм, окрашиваются равномерно, однако в удлиненных клетках могут наблюдаться неоднородные по тинкториальным свойствам участки. В старых культурах возможно наличие кокковидных или удлиненных форм. В мазках из патологического материала характерно расположение клеток кучками, в виде «палисада».

Культивирование затруднительно. Поэтому в питательные среды добавляют, особенно при первичной изоляции, ростовой фактор — микобактин (0,03 мкг/мл). Остальные микобактерии продуцируют его самостоятельно. Препарат микобактина можно заменить экстрактами из микобактерий других видов, которые вносят в питательную среду в количестве 1-4%. Наибольшее количество ростового фактора содержится в экстрактах из М. phlei.

Аэроб, температурный оптимум 38°С. В жидких питательных средах растет с образованием нежной, беловатой пленки (через 3-4 месяца культивирования становится толще и опускается на дно пробирки). На плотных питательных средах макроскопически видимый рост появляется через 1,5-2 месяца. Колонии сухие, сморщенные, беловато-серого или желтого цвета.

Лабораторная диагностика бактерий рода Bacillus

Бациллы — свободноживущие, одноклеточные, нефотосинтезирующие, аэробные, палочковидные клетки, образующие типичные эндоспоры.

Род Bacillus содержит несколько патогенных для животных и человека видов (табл. 2)

Таблица 2. Поражения, вызываемые различными видами рода Bacillus

Поражение	Возбудитель	Образцы для исследования
Сибирская язва	В. anthracis	Отделяемое из очагов поражения, кровь (с уха), спинномозговая жидкость, сыворотка (для серологии)
Бактериемии, септицемии	В. alvei, В. cereus, В. megaterium, В. pumilus, В. sphaericus, В. subtilis	Кровь
Менингиты	В. alvei, В. circulans, В. megaterium, В. pumilus, В. sphaericus, В. subtilis	Спиномозговая жидкость
Глазные инфекции	В. brevis, В. cereus, В. coagulans, В. subtilis, В. thuringiensis	Биоптаты роговицы и стекловидного тела
Пневмонии	В. cereus, В. sphaericus, В. subtilis	Мокрота, промывная жидкость бронхов, биоптаты легочной ткани, плевральная жидкость (при наличии)
Эндокардиты	В. cereus, В. subtilis	Кровь
Пищевые токсикоинфекции	В. cereus, В. megaterium	Подозрительная пища (25-50 г), испражнения, рвотные массы.