1. На поверхность мпа пипеткой наносят взвесь бактерий определённой концентрации таким образом, чтобы получился равномерный газон культуры.

2. Не позднее чем через 15 мин после инокуляции на поверхность питательной среды наносят диски с АБП. Аппликацию дисков проводят с помощью стерильного пинцета. Расстояние от диска до края чашки и между дисками должно быть 10 – 15 мм. Таким образом, на одну чашку диаметром 100 мм следует помещать не более 6 дисков с АБП. Диски должны равномерно контактировать с поверхностью агара, для чего их следует аккуратно прижать пинцетом.

3. Непосредственно после аппликации дисков чашки Петри помещают в термостат кверху дном и инкубируют при температуре 35 0с в течение 18 – 24 ч. (в зависимости от вида тестируемого микроорганизма).

4. Учёт результатов. Диаметр зон задержки роста измеряют с точностью до 1 мм. Для того, чтобы отнести изучаемую культуру к определенной категории по уровню чувствительности, диаметр зон (в мм) сопоставляют с данными стандартных таблиц. Для каждой группы антибиотиков разработаны индивидуальные критерии оценки результатов.

Метод серийных разведений в жидкой питательной среде

Методы серийных разведений основаны на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибактериальных препаратов – величины его МПК. МПК – минимальная концентрация, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма в бульонной культуре или на плотной питательной среде. Принцип определения МПК основан на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных в различных концентрациях вносят в жидкую питательную следу (бульон). Затем бактериальную суспензию определенной плотности помещают в бульон с антибиотиком. После инкубации при температуре 37 ⁰С проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать МПК. Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл.

Интерпретация результатов оценки чувствительности заключается в прогнозировании результата антибактериальной терапии на основе данных исследования возбудителя инфекционной болезни in vitro.

Интерпретация результатов оценки антибиотикочувствительности заключается в отнесении исследуемого микроорганизма к одной из трёх категорий.

• Чувствительный – Штамм подавляется при концентрациях АБП, создающихся в органах и тканях человека при рекомендуемых режимах дозирования. Лечение инфекции, вызванной микроорганизмом, относящимся к этой категории, обычно эффективно при применении АБП в рекомендуемых дозах.

• Промежуточный – МПК АБП в отношении штаммов этой категории выше, чем в отношении чувствительных, но находится в пределах, достижимых при рекомендуемых режимах дозирования. Лечение инфекции, вызванной микроорганизмом, относящимся к этой категории, может быть эффективным при применении АБП в повышенных дозах, либо при локализации очага инфекции в тех органах и тканях, в которых в силу физиологических особенностей создаются повышенные концентрации АБП.

• Устойчивый – Штамм не подавляется при концентрациях АБП, создающихся в органах и тканях при рекомендуемых режимах дозирования. Для устойчивых штаммов характерно наличие определённых механизмов резистентности. Лечение инфекции, вызванной микроорганизмом, относящимся к этой категории, скорее всего, будет неэффективным.

Интерпретация осуществляется на основании сопоставления результатов исследования (величины МПК АБП или диаметра зоны ингибиции роста) с пограничными значениями этих параметров, отделяющих чувствительные штаммы от промежуточных и промежуточные от устойчивых.

Учёт результатов определения чувствительности бактерий

к антибиотикам диско-диффузионным методом

Антибиотики	Диаметр зоны задержки роста		Культура
	B. megaterium	K. pneumoniae	R	I	S

Учёт результатов определения чувствительности бактерий

к антибиотикам методом серийных разведений

	Разведения антибиотиков
Вид бактерий	1/100	1/50	1/25	1/12,5	1/6,25	1/3,125	К.	МПК
B. megaterium
K. pneumoniae