Реакция преципитации. Преципитация в геле. Иммуноэлектрофорез.

РП

1. Кольцепреципитация – наливаем сыворотку, содержащюю АТ, а потом аккуратно наслаиваем АГ –в медиц. целях – термокольцепреципитация – р-ция Сколи – для обнаружения АГ сибиреязвенного МКБ на сырье от животных или в трупном материале; примен. в суд.мед.экспертизе (опред. видовой принадл-ти белка крови), в пищев. пром. (опред. фальсификации прод-тов), в изобраз. иск-ве (ракрытие секрета красок).

2. РП в геле – двойная иммунодиффузия по Оухтерлони – можно опред. и АТ, и АГ.

В агаре в лунки вводят АГ и добавляют АТ (иммунные сыворотки) – они диффундируют и в обл. их контакта – усы преципитации – преципитат в виде белой полосы.

3. Иммуноэлектрофорез – сочетание электрофореза и иммунной диффузии (П)

Смесь АГ вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, АТ которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с АГ линии преципитации.

4. Микропреципитация в геле по Манчини – опред. Ig

В агар внос. АТ к IgG, то есть антиG-АТ (приготовление: берется человеч. сыворотка с IgG, их вводят кролику, у него выраб. АТ (АТ к IgG). В лунку вносим IgG. АТ и АГ диффундируют – определяем (+) или (-) р-ция и кол-во АТ. Для IgМ все соотв.

Погружаем в краску амидо-шварц.

После застывания в геле делают лунки, в которые помещают АГ в различных разведениях. АГ, диффундируя в гель, образует с АТ кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации АГ.

Отличия РА от РП:

1. АГ: корпускул. / молекул.

2. Разводим: сыворотку / АГ

3. Рез-т: Хлопья / равномерное помутнение, кольца или дуги

Реакция нейтрализации.

АГ – токсин, АТ – антитоксин. Примен-ся in vitro и in vivo.

In vivo – в опыте на животных для опред. антигенности какого-л. МКБ.

1ой мыши ввод. антитокс. сыв. против токсина ботулизма типа А + неизвестн. МКБ (токсин Х) à умерла

2ой мыши – антитокс. сыв. типа В + токсин Х à жива (АТ и АГ специфичны)

3ей – С + токсин Х à умерла; 4ой – Д + токсин Х à умерла

Рез-т: ботулизм типа В.

in vitro для опред. титра антитоксической сыворотки. - Р-ция флокулляции: - (от лат . flоecus - хлопья шерсти) - появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин - антитоксин или анатоксин – антитоксин.

Инициальная флокуляция происх. там, где ингридиенты по силе равны.

П ринцип реакции преципитации

Сила диф.токсина (LF)	2.0	2.0	2,0	2,0	2,0
Антитоксическая противодифт.сывор.(объем разный) (AE)	0.1	0,15	0,2	0,25	0,3
Результат			Здесь флокуляция

Сила Аг = сила Антитоксина

(если нет рав-ва, то с опозданием пойдет)

В 0,2 мл сыворотки 2 АЕ

В 1 мл сыворотки- X

X=10 AE

Антитоксическая сыворотка – содержит АТ против токсинов. Исп-ся для лечения. Титр – наим. Кол-во, которое нейтрализует энное кол-во DLM токсина для морской свинки весом 350 г.

А/б на токсины не действ.!

Токсины – ботулизм, газовая гангрена – лечение антитокс. сыворотками.

Т.к. сыв. все равно чужеродная (напр, лошадиная) – проверяют чувств-ть – введение в/кожно на ладони, покраснение à противогистаминные препараты!

Лечебные сыворотки ввод-ся по Безредко – дробно, сначала 0,5 мл, ждем 0,5 часа àсенсибилизация, вводим остальное.

Под рукой – антигистаминные препараты!

1 мл = 3 МЕ, надо 30 МЕ, значит вводим 10 мл, если ампулы по 2 мл à 5 амп.

Иммунолюминесцентный метод и его применение в диагностике инфекционных заболеваний.

Реакция связывания комплемента. Реакция иммунного гемолиза.

Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип, применение для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний.

Методы оценки иммунного статуса организма.

Иммунный статус – интегральная хар-ка состояния ИмС.

При подозрении неадекв. работы ИмС исслед. колич. и функц. (качеств.) показатели работы ИмС.

При необх-ти назнач. иммунотропные препараты:

• Иммуностимуляторы

• Иммуномодуляторы

• Иммуносупрессоры

или заместительную терапию.

Исследование проводится в 2 этапа:

1. ур-нь – выявление грубых дефектов ИмС – ориентировочный.

2. ур-нь – более тонкое изучение параметров ИмС – уточнение пораж. звена.

Показания к исследованию:

• тяжелое течение инф.

• хронич. инф.

• часто рецидив. инф.

• хронич. очаги воспален.

• коллагенозы

1 ур-нь – исследование фагоцитарной ф-ции, ф-ции комплемента, исслед. Т-сист. (общее кол-во лейкоцитов, подсчет Т-л, осн. субпопуляций (Т-х, Т-рег,…))

2 ур-нь – те же тесты, но белее тонкие: фагоцитоз (хемотаксис, рецепт., адгезия), Т-сист. (ЦК, ИНФ, ИЛ, ФРО), В-сист. (Ig, классы, подклассы)

Система интерферона: природа, роль в противовирусной защите. Применение препаратов интерферона в лечебной практике.

Интерферон α (лейко#), β (фибробл.), γ (иммунный – Тл) – хотя может выраб. любая # орг-ма, если на нее напал вирус.

Низкомолек. противовир. белок – единств. действ. на вирус внутри # - блокирует м-РНК à нет репродукции

Действие неспецифично – против любого вируса! Но обл. видовой специф-тью (интерферон чел-ка)

Аутоантигены. Аутоантитела. Природа аутоиммунных реакций.

Основные виды иммунной патологии:

1. иммунодефициты – недостаточность

   1. первичные (врожденные)

   2. вторичные (приобрет.)

2. аутоиммунитет

3. аллергия (связ. с иммунологич. гиперчувств.)

Аутоиммунитет – рез-т нарушения иммунологич. толерантности.

(Центральная ИТ – киллинг аутореактивных Т-л в тимусе и В-л в кост. мозге. (95% погибает, 5% выходит). Нарушение отсева и киллинга  аутоиммунные болезни.)

Эффекторы аутоимм. повреждений:

• Специфические:

  • АТ

  • Т-х

• Неспециф.

  • Комплемент

  • Фагоциты

  • NK и др. #

Ревматоидный артрит: «ревматоидный фактор» - АТ против IgG

Врожденные (первичные) и приобретенные (вторичные) иммунодефициты: этиология, проявления, диагностика. (Л)

Основные виды иммунной патологии:

1. иммунодефициты – недостаточность

   1. первичные (врожденные)

   2. вторичные (приобрет.)

2. аутоиммунитет

3. аллергия (связ. с иммунологич. гиперчувств.)

Иммунодефициты – патол. работы ИмС, кот. проявл. в снижении ее акт-ти.

Первичные (врожденные).

Причина – генетические дефекты.

1. В-иммунодефициты

2. Т-ИД

3. Комбинированные

4. Дефект ф-ций фагоцитов или комплемента.

Вторичные (приобретенные).

Причина – заболевания, лечение (цитостатики), возрастные ИД, д-ие неблагоприятн. ф-ров ср. обит., стрессы, радиация.

Физиологич. ИД: при беременности, у стареющих, у n/b и у детей раннего возраста.

??? есть еще что-н.?