1 [Рименяктг три типа ayксотрофных мутантов:

• ауксотрофы по гомосерину или треонину с подавленной гомосериикиназой:

• метионин- и трсонинчувствительные штаммы с существенно сниженной активностью гомосериндегидрогеназы:

- аналогорезистетные прстУгрофпйс-арЩуПёпты лизина, устойчивые к треонину и ? аминоэтицилцистеину. с аспартаткиназой, нечувствительной к согласованному ингибированию лизином и треонином.

Микробиологический процесс производства лизина: выход лизина зависит от температуры среды, концентрации кислорода, длительности ферментации, дозы и возраста посевного материала. Помимо Сахаров (7-12 % по объему), сульфата аммония и фосфатов калия, в сред) вносят кукурузный экстракт в качестве источника биологически активных веществ (1.2-1.5 % по содержанию сухих веществ), а также мел и синтет ический пеногаситель.

Среда должна содержать (в л): 200 мг метионина, 800 мг треонина. 15—20 мкг биотина (при меньших концен трациях биотина синтезируется глутаминовая кислота, при 2.5 мг - молочная кислота, как механизм обратного действия). Соотношение углерода и азота в среде оптимально как 11:1 (при его увеличении выход лизина падает, при уменьшении - накапливается аланин). Культивирование осуществляется в строго стерильной глубинной аэробной периодической культуре в аппаратах объемом 50 и 100 м при коэффициенте заполнения 0.75. Процесс длится 48-72 ч

при 29-30 ° С. контролируемом рН 7.0-7.5. непрерывном перемешивании и избыточном давлении 20-30 кПа. Уровень аэрации составляет 1m^j воздуха/м' среды в минуту. Для пеногашения используют кашалотовый жир или синтетические масла (0.5 % от объема среды). В первые сутки по требляется около 25 % Сахаров и почти все аминокислоты, при этом образуется практически вся биомасса.

Для стабилизации рН периодически проводят поддтитровку культуры 25 % раствором аммиака. При дополнительном дробном введении в аппарат углеводов и азота выход лизина можно повысить. Конечная концентрация кислоты достигает 40 г/л.

Задача 80

6. Методом клеточного синтеза или метод "слияния протопластов" нашел широкое применение при гибридизации видов стрептомицетов.

11ри применении этого метод частота гибридизации при этом увеличивалась примерно на 4 порядка по сравнению с наблюдаемой при обычном скрещивании.

Эффективным индуктором слияния протопластов является полиэтиленгликоль. который снижает поверхностный заряд мембран. Гем самым создаются условия для их тесного контакта и слипания. В местах слипания происходит разрыв мембран, и содержимое двух соседних протопластов объединяется. Образующиеся структуры сохраняют способность к восстановлению клеточной стенки.

11 ри слиянии протопластов объединяются и взаимодействуют целые геномы, а также все компоненты родительских клеток. Кроме того, в акте слияния может участвовать более двух протопластов разных штаммов и в результате сразу появляются рекомбипан ты. наследующие признаки трех и более родителей.

Метод слияния протопластов позволяет объединять в одном геноме мутации, положительно влияющие на продуктивность, и избавляться от вредных мутаций, снижающих жизнеспособность штаммов-продуцентов.

С помощью метода слияния протопластов удалось создать ряд грибных штаммов, отличающихся высокой скоростью роста и большим выходом антибиотика - цефалоспорина.

Применительно к¹'клеткам жйвотийЯ тот^-' Ж'Щгтол известен под названием «гибридомная технология". Гибридомы - это клеточные линии, полученные от слияния нормальных лимфоцитов и миеломных опухолевых клеток. Гибридомы сохраняют две основные черты родителей:

• способность к неограниченному росту (наследуется от опухолевой клетки), что чрезвычайно важно при разработке систем культивирования;

• способность к синтезу в культуре специфических антител (наследуется от лимфоцита).

Например, для получения гибридом В-лимфоциты и миеломные клетки выделяют от мышей или крыс. Клетки миеломы (плазмоциты) - злокачественно трансформированные лимфоидные клетки костного мозга, представляющие собой клоны, образованные при делении единичных измененных опухолевых В-клеток. каждый из которых синтезирует моноклональные антитела неизвестной специфичности и обладает способностью к неограниченному размножению in vivo и in vitro.

Получают гибридные клетки - продуценты моноклональных антител, наследующие от миеломного партнера только способность к неограниченному размножению.