Проведение анализа

В пластиковую пробирку внести 400 мкл сыворотки и добавить 2 мл осаждающего реагента. Тщательно перемешать в течение 15 секунд. После чего центрифугировать 3000 об/мин в течение 5 минут. Отобрать 1мл супернатанта в чистую пробирку и использовать для последующего определения холестерола в ЛПВП.

Добавить в кювету	Опытная проба	Холостая проба	Стандартная проба
1. Супернатант	10 мкл	--	--
2. Стандарт	--	--	10 мкл
3. Дистиллиро-ванная вода	--	10 мкл	--
4. Реагент	1 мл	1 мл	1 мл

Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при температуре 37С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 550 нм (А). Окраска стабильна в течение 30 минут.

Расчет

Расчет по стандарту концентрации холестерола в сыворотке проводят по формуле:

Аоп С (ммоль/л) = -----------  Сст, Аст

где А_{оп / ст} – оптическая плотность опытной пробы и стандартной,

соответственно;

С_ст – концентрация стандарта (ммоль/л).

Общий холестерол сыворотки
Норма	Пограничные значения	Высокий уровень
 5,2 ммоль/л	5,2-6,1 ммоль/л	 6,2 ммоль/л
Холестерол ЛПВП
Норма	Пограничные значения	Низкий уровень
 0,9 ммоль/л	 0,9 ммоль/л;  0,9 ммоль/л	 0,9 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение: Содержание холестерола в ЛПВП в кови здоровых людей мало меняется с возрастом и не подвержено колебаниям.

Величины содержания холестерола в ЛПВП  0,9 ммоль/л свидетельствуют о нарушении липидного обмена и угрозе атеросклероза. Повышение содержания холестерола в ЛПВП, как и повышение содержания общего холестерина в результате увеличения этой фракции, является доброкачественным состоянием.

Тема 7. Белковый обмен

Лабораторная работа № 11.

Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови кинетическим методом

Принцип метода: Аланинаминотрансфераза (АЛТ) катализирует обратимое трансаминирование L-аланина в L-глутамат с образованием пировиноградной кислоты. Далее пировиноградная кислота под действием лактатдегидрогеназы (ЛДГ) восстанавливается до D-лактата с одновременным окислением НАДН до НАД⁺.

АЛТ L-Аланин + -кетоглутарат ----------- L-глутамат + Пируват

ЛДГ Пируват + НАДН + Н+ ----------- D-Лактат + НАД+

Кинетическое спектрофотометрическое определение активности АЛТ основано на регистрации падения оптической плотности анализируемой пробы при длине волны 340 нм. Скорость снижения оптической плотности пробы при длине волны 340 нм прямо пропорциональна активности АЛТ в ней.

Линейность метода: 4-280 Е/л.

Норма: мужчины –  41 Е/л (37С);

женщины –  31 Е/л (37С).

АЛТ в сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25С) в течение 24 часов, при замораживании (-20С) в течение 3 месяцев.

Оборудование и реагенты: