7. Группы крови человека.

1. Групповые антигены и антитела.

• Групповые антигены (агглютиногены): известно несколько десятков антигенов в эритроцитах, которые дают 10 млн групповых сочетаний.

• Групповые антитела (агглютинины и гемолизины плазмы).

• Нормальные антитела (син.: врожденные, полные) реагируют с антигенами при комнатной температуре в солевой среде, инактивируются при нагревании. Эти антитела имеются, как правило, в системе АВ0.

• Изоиммунные антитела (син.: приобретенные, неполные) образуются в ответ на поступление соответствующего антигена. Они термоста­биль­ны, не реагируют с антигенами в солевой среде (определяются непрямой пробой Кумбса).

2. Системы групп крови (по убывающей антигенной силе).

• Система АВ0 (К. Ландштейнер, 1901).

• В эритроцитах имеются агглютиногены (антигены) А, В. Это олигосахариды, связанные с сфинголипидами и белками мембраны эритроцитов. В плазме имеются нормальные антитела – агглютинины  (анти–А) и  (анти–В), относящиеся к IgМ (выработанные в процессе иммунизации аглютинины относятся к IgG):

• (I) 0  ( 33 % людей).

• (II) А  ( 38 %). Кроме людей с А₁ – сильным антигеном (1,3 млн молекул А в эритроците), есть люди с А₂ – слабым антигеном (0,25 млн молекул А в эритроците), имеется риск ложного определения первой группы крови.

• (III) В  ( 21 % людей).

• (IV) АВ 0 ( 8 % людей).

• Образование агглютиногенов А и В в эритроидных клетках кодируется тремя генами, расположенными в хромосоме 9. Они контролируют образование ферментов синтеза олигосахаридов в конечном счете формирующих систему АВО (материал носит справочный характер).

• Н-ген (аллели HH, Hh) кодирует образование фермента фу­козилтрансферазы, образующей фукозо-α1,2-галактозу‑β, которая является предшественником как А, так и В агглютиногенов. При генотипе hh образуется неактивная трансфераза и предшественник не синтезируется.

• Ген А (аллели АА, Аа) кодирует А-специфическую трасферазу, продукт реакции которой – N-ацетил-галактозамин – присоединяется к предшественнику.

• Ген В (аллели ВВ, Вb) кодирует В-специфическую трансферазу, присоединяющую к предшественнику галактозу.

• I (0) группа крови возникает, когда в локусе АВ0 отсутствуют гены А и В (в этом случае локус Н-гена может иметь любую аллель: HH, Hh, hh), или при наличии в локусе Н-гена аллели hh, в этом случае не образуется предшественник агглютиногенов А и В, и тогда может быть любая аллель в локусе АВ0.

• II (A) группа крови возникает, когда в локусе Н-гена имеются аллели HH или Нh (предшественник образуется), а в локусе АВ0 имеются аллели АА или Аа (образуется агглютиноген А).

• III (B) группа крови возникает, когда в локусе Н-гена имеются аллели HH или hh (предшественник образуется), а в локусе АВ0 имеются аллели ВВ или Вb (образуется агглютиноген В).

• IV (AB) группа крови возникает, когда в локусе Н-гена имеются аллели HH или Нh (предшественник образуется), а в локусе АВ0 имеются аллели АА или Аа и ВВ или Вb (образуются агглютиногены А и В).

• Система Резус (Rh) (К. Ландштейнер, А. Винер, 1940) состоит из ~ 40 антигенов, наиболее сильным из которых является D (способен иммунизировать человека). Антиген имеется в эритроцитах 86 % людей (Rh⁺) и отсутствует у 14 % людей (Rh^-); врожденных антител нет, могут быть антитела изоиммунного происхождения (IgG–анти D). Rh-конфликт наступает: 1) при переливании Rh⁺–крови Rh^– реципиенту; 2) при развитии Rh⁺–плода у Rh^––матери (Rh–фактор появляется у плода с 3–го мес., достигает иммунологической активности к концу беременности и через плаценту поступает к матери. Образующиеся у матери Rh–антитела проникают в плод. Если отец Rh⁺ и мать Rh^–, то плод в 50–100% Rh⁺); 3) Rh^– кровь матери после Rh–конфликта с плодом периливается Rh⁺–реципиенту.

• Система Келл: имеется активный фактор Келл у 8 % людей и мало активный фактор Челлано у 99 % людей; антитела изоиммунного происхождения.

• Система Даффи: имеются два антигена – более активный у 66 % людей и менее активные у 83 % людей, антитела изоиммунного происхождения.

• Другие системы: MNS, Кидд, Лютеран, I, Левис и др.

3. Методы исследования групп крови.

• Определение группы крови в системе АВ0.

Принцип метода: для определения групп крови используется явление агглютинации исследуемой крови со стандартными сыворотками. При встрече одноименных агглютиногенов и агглютининов (А+; В+) происходит агглютинация эритроцитов.

В углубления планшеты под соответствующими обозначениями наносят разными пипетками по капле (0,1 мл) сыворотки 0 (I), А (II), В(III) групп крови двух серий. Из проколотого пальца стеклянной палочкой переносят на пластинку 6 маленьких капель (~ 0,01 мл) крови каждую рядом со стандартной сывороткой (количество крови должно быть в ~ 10 раз меньше сыворотки). Разными палочками размешивают каплю крови с сывороткой до равномерного розового цвета. Планшету периодически покачивают и реакция агглютинации оценивают через 5 мин. При этом капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Чтобы реакцию агглютинациии не маскировали образующиеся иногда «монетные столбики» эритроцитов, через 3 мин от начала реакции в каждую пробу надо добавить 1 каплю изотонического раствора NaCl. Группа крови устанавливается по наличию или отсутствию агглютинации. Результат реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы двух серий должны совпадать. (Температура в помещении должна быть в пределах 15 – 25°С.) Трактовка результатов:

• агглютинация не наступала ни в одной капле сывороток – группа крови 0  (I);

• агглютинация произошла с сыворотками I и III групп – группа крови А (II);

• агглютинация наступила с сыворотками I и II групп – группа крови В (III);

• агглютинация наступила с сыворотками I, II и III групп. Для исключения неспецифической агглютинации необходимо провести реакцию с сывороткой IV группы, если агглютинация не наступит, исследуемая кровь АB0 (IV) группы.

В настоящее время рекомендована методика определения групп крови с помощью Цоликлонов анти-А и анти-В, которая имеет более высокую специфичность и выраженность реакции агглютинации, поэтому можно пользоваться одной серией реагентов.

В углубления планшеты двумя пипетками наносят по капле Цоликлона анти-А и анти-В, рядом с каплями антител наносят по маленькой капле крови (в 10 раз меньше капли цоликлонов), и капли смешивают. Результат реакции оценивают в течение 2,5 мин. Трактовка результатов:

• агглютинации нет ни с цоликлоном анти-А, ни с цоликлоном анти-В – группа крови 0(1),

• агглютинация только с цоликлоном анти-А – группа крови А(II),

• агглютинация только с цоликлоном анти-В – группа крови В(III),

• агглютинация имеется как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В – группа крови АB0(IV). В этом случае для исключения спонтанной агглютинации необходимо провести контрольное исследование крови путем добавления капли изотоническим раствором хлорида натрия, в котором агглютинация должна отсутствовать.

• Определение резус‑принадлежности.

Для определения резус-принадлежности используют явление агглютинации, возникающее при контакте резус-агглютиногена эритроцитов с антирезус-агглютинином.

На планшету под соответствующими обозначениями наносят по одной капле контрольной сыворотки (стандартная сыворотка группы крови испытуемого) и стандартной антирезусной сыворотки. Рядом помещают по капле исследуемой крови (количество крови должно быть примерно вдвое меньше капли сыворотки). После размещения в течение 5 минут наблюдают за реакцией.

Трактовка результатов: если в пробе со стандартной антирезус-сывороткой произошла агглютинация – иследуемая кровь резус-положи­тель­ная; если агглютинация не произошла – кровь резус-отрицательная. В контрольной сыворотке агглютинации не должно быть.

• При неблагоприятном трансфузионном и акушерском анамнезе определение изоиммунных антител непрямой пробой Кумбса.