Тема 4. Превращения безазотистых органических веществ под влиянием микроорганизмов

Занятие 6. Выращивание культур микроорганизмов,

вызывающих брожение и неполное окисление субстрата

План

Т. Постановка элективных культур микроорганизмов, вызывающих процессы неполного окисления субстрата:

1. Спиртовое брожение.

2. Молочнокислое брожение.

3. Маслянокислое брожение.

4. Анаэробное разложение пектиновых веществ.

5. Анаэробное разложение клетчатки.

6. Аэробное разложение клетчатки.

7. Аэробное окисление этилового спирта в уксусную кислоту.

8. Правила работы с чистыми культурами.

Материалы и оборудование

1. Спиртовое брожение: дрожжи, 10-процентный раствор сахарозы, концентрированный и 10-процентный раствор щелочи, кристаллический йод, баритовая или известковая вода, водяная баня, горелка, треножник, термометр, колба на 200-250 мл, пробка с газоотводной трубкой, ванночка или кристаллизатор, пробирка, мензурка на 100 мл.

2. Молочнокислое брожение: свежее молоко, рассол кислой капусты, раствор фенолфталеина, 0,1 н. раствор гидроксида натрия (NaOH), дистил­лированная вода, вата, коническая колба на 100-150 мл, пипетка на 20 мл, пипетка на 10 мл, коническая колба на 100 мл, термометр, бюретки.

3. Маслянокислое брожение: солод, сахароза, почва (желательно са­довая, с перегноем), семена гороха, мел, вода, весы с разновесами, газовая горелка, высокая пробирка и кружка.

4. Анаэробное разложение пектиновых веществ: стебли льна или ко­нопли, кружка, горелка, пробирка, нитки, пробиркодержатель, ножницы, термостат.

5. Анаэробное разложение клетчатки: питательный раствор следую­щего состава: вода - 100 мл, пептон - 0,1 г, дигидрофосфат калия (КН₂Р0₄) -0,1 г, сульфат магния (MgS0₄*7H₂0) - 0,05г, хлорид кальция (СаС1₂) - 03 г, дигидрофосфат аммония (NH₄H₂P0₄) - 0,2 г, карбонат кальция (СаСОз) - 0,5 г, колбы на 50-100 мл, закрытые пробками с газоотводными трубками, термостат, почва, фильтровальная бумага.

6. Аэробное разложение клетчатки: кремневые пластинки в чашках Петри, фильтровальная бумага, питательная среда следующего состава: дистиллированная вода - 200 мл, нитрат калия (KN0₃) - 2,5 г, дигидро­фосфат калия (КН₂Р0₄) - 1 г, хлорид натрия (NaCi) - 0,5 г, сульфат магния (MgS0₄*7H₂0) - 0,5г, сульфат железа (II) (FeS0₄*7H₂0) - 0,01 г, сульфат марганца (III) (Мп₂(80₄)з) - 0,01 г, унавоженная почва или перегной.

7. Аэробное окисление этилового спирта в уксусную кислоту: 2 ко­нические колбы на 100-150 мл, непастеризованное пиво, 10-процентный раствор уксусной кислоты, вата, нитки, бумага, чайный "гриб".

Ход работы

Спиртовое брожение. За 30 мин. до занятия дрожжи разводят в 10- процентном растворе сахарозы. В коническую колбу объемом 200-250 мл наливают 50 мл 10-процентного раствора сахарозы и 10 мл взвеси дрож­жей. Колбу закрывают пробкой с газоотводной трубкой. Для собирания га­за нижний изогнутый конец трубки опускают в кристаллизатор с водой и надевают на него пробирку, наполненную водой. Колбу погружают в во­дяную баню с температурой 30-3 5°С. На протяжении всего опыта такая температура поддерживается при помощи спиртовой (или газовой) горел­ки. Через 30-40 мин., когда весь воздух из колбы будет вытеснен углекис­лым газом, собирают последний в новую пробирку, которая также должна быть заполнена водой.

Молочнокислое брожение. В широкодонную колбу объемом 100-150 мл наливают 40 мл свежего молока, закрывают ватной пробкой и помещают в термостат при температуре 30-35°С до следующего занятия.

Маслянокислое брожение. В кружку насыпают 5 г солода (источник органических соединений), 2 г мела (для нейтрализации масляной кисло­ты), 5 г сахара и все заливают 100 мл дистиллированной воды. Смесь ки­пятят в течение 5 мин. Горячую жидкость переливают в высокую пробир­ку, на дно которой бросают для заражения бактериями комочек почвы или семена гороха. Пробирку помещают в термостат при температуре 30-35°С на 7 дней.

Анаэробное разложения пектиновых веществ. Делают снопик из 5-7 стебельков льна длиной 4-5 см, перевязывают его в двух местах ниткой. Для удаления экстрактивных веществ снопик погружают в кружку с водой и кипятят около 10 мин. Затем снопик переносят в пробирку с водой и снова кипятят, чтобы удалить из воды кислород. Для заражения среды бакте­риями вносят в пробирку кусочек стебля льна. Пробирку помещают в тер­мостат при температуре 25-30°С на 10-14 дней.

Анаэробное разложение клетчатки. В колбу на 50-100 мл помещают полоски фильтровальной бумаги и доверху заливают питательной средой следующего состава:

Затем заражают среду бактериями, внося комочек почвы (богатой перегноем), закрывают пробкой с газоотводной трубкой и помещают в термостат при температуре 30°С на 5-7 дней. Под влиянием бактерий в анаэробных условиях фильтровальная бумага будет разлагаться.

Результаты опытов учитываются через 2 недели.

Аэробное разложение клетчатки. На кремневые пластинки в чашки Петри помещают фильтровальную бумагу, смоченную 2-3 мл питательно­го стерильного раствора следующего состава:

Затем на поверхности фильтрата размещают в шахматном порядке 10-15 маленьких комочков почвы. Чашки Петри помещают в эксикатор над водой, а последний - в термостат при температуре 25-30°С на 15 дней.

Выращивание уксуснокислых бактерий. Уксуснокислые бактерии окисляют этиловый спирт до уксусной кислоты и воды. Процесс аэробный, идет с накоплением значительного количества энергии:

Известно несколько видов уксуснокислых бактерий, например: Асе- tobacter aceti, A. Pasteurianum, A. xylinum.

Все уксуснокислые бактерии грамотрицательны, имеют форму пало­чек, часто слагающихся в цепочки, образуют на поверхности растворов ха­рактерные пленки, состоящие из полисахаридов.

Уксуснокислые бактерии окисляют спирт (вино, пиво) и другие про­дукты, содержащие алкоголь.

Правила работы с чистыми культурами. На практических занятиях по микробиологии используют обычно чистые культуры микроорганиз­мов, выращенные в пробирках. Основное условие работы с этими культу­рами - сохранение их стерильности. Для этого необходимо знать основные правила работы с чистыми культурами. Пересев культуры из пробирки на подготовленную среду производится микробиологической иглой с петель­кой на конце (так называемой петлей). Петля предварительно стерилизует­ся в пламени газовой или спиртовой горелки. Работающий берет петлю в правую руку, а пробирку с культурой в левую и держит ее в несколько на­клонном положении; при помощи большого пальца и мизинца (или одного мизинца правой руки, прижимая его к ладони) вынимает из пробирки ват­ную пробку, обжигая края пробирки в пламени горелки, и с помощью пет­ли правой рукой берет с поверхности питательной среды немного микроб­ной массы. Затем, снова обжигая края пробирки и пробку, плотно закрыва­ет ею пробирку и ставит ее в штатив.

Микроорганизмы, взятые при помощи петли, переносят на предмет­ное стекло в каплю воды. Если микроорганизмы из пробирки нужно взять еще раз, всю процедуру повторяют снова. После получения мазка петлю обязательно вторично стерилизуют. Все предметные и покровные стекла и пипетки после работы тоже тщательно дезинфицируют. Стекла и пипетки помещают в раствор фенола или спирта.

Контрольные вопросы

1. Что вы понимаете под дыханием микроорганизмов?

2. Какие типы дыхания микроорганизмов вы знаете?

3. Сущность и возбудители спиртового брожения.

4. Сущность и возбудители молочнокислого брожения.

5. Сущность и возбудители маслянокислого брожения.

6. Сущность и возбудители уксуснокислого "брожения".

7. Использование различных типов брожения в промышленности и сельском хозяйстве.

Занятие 7. Знакомство с микроорганизмами, вызывающими брожение

План

1. Качественное определение молочной кислоты, образующейся в ре­зультате молочнокислого брожения.

2. Микроскопическое исследование микроорганизмов молочнокисло­го брожения: а) гомоферментативного; б) гетероферментативного.

3. Анализ продуктов, полученных в результате маслянокислого бро­жения.

4. Микроскопическое исследование маслянокислого брожения.

5. Микроскопическое исследование бактерий: а) разложения пектино­вых веществ; б) анаэробного и аэробного разложения клетчатки; в) уксусно­кислых.

Материалы и оборудование

1. Культуральная жидкость с бактериями маслянокислого и молоч­нокислого брожения: рассол капусты или огурцов, скисшее молоко, куль­туры бактерий пектинового брожения, анаэробного и аэробного разложе­ния клетчатки, чайный "гриб", культура уксуснокислых бактерий.

2. Красители: раствор йода, фенолфталеин, метиленовый синий.

3. Реактивы: гидроксид бария, 96-процентный спирт, серная кислота (H₂S0₄) конц., 0,1 н раствор гидроксида натрия (NaOH), 5-процентный раствор перманганата калия (КМп0₄), гидроксид аммония (NH4OH), 1- процентый раствор нитрата серебра (AgN0₃), 1-процентный раствор хло­рида железа (III), сода, смесь спирта с эфиром 1:1, 5-процентный раствор фенола.

4. Иммерсионное масло.

5. Дистиллированная вода.

6. Предметные и покровные стекла.

7. Предметные стекла с углублением.

8. Микроскопы.

9. Препаровальные иглы.

10. Стеклянные палочки.

11. Микробиологические петли.

12. Длинная стеклянная трубка.

13. Спиртовка или газовая горелка.

14. Пробирки.

15. Штативы для предметных стекол.

16. Фильтровальная бумага.

17. Бюретки.

18. Капельная и мерные пипетки на 10-20 мл.

19. Конические колбы на 50 мл.

20. Лотки.

Основные сведения

Обмен веществ у микроорганизмов складывается из двух основных процессов: энергетического (получение энергии за счет окисления суб­страта) и конструктивного (биосинтез веществ в клетке). Эти два процесса неразрывно между собой связаны и происходят за счет сопряженных био­химических ферментативных реакций.

Окисление субстрата у различных микроорганизмов происходит разными путями. У аэробных микроорганизмов этот процесс протекает при участии кислорода воздуха - его называют дыханием. В результате та­кого окисления осуществляется полное расщепление углеводов до углеки­слого газа и воды, при этом выделяется значительное количество энергии, запасаемой в основном в виде молекул АТФ. У анаэробных микроорга­низмов субстрат окисляется без доступа кислорода. С помощью ферментов водород отщепляется от субстрата и переносится на определенные органи­ческие акцепторы. В результате образуется ряд органических веществ, таких, как спирты и органические кислоты (молочная, масляная, пропионо- вая), и аккумулируется небольшое количество энергии. Такой тип окисле­ния субстрата называется брожением. В зависимости от конечных продук­тов, получаемых в результате брожения, его называют спиртовым, молоч­нокислым, маслянокислым и т.д.

Для ряда микроорганизмов характерен процесс неполного окисления субстрата с использованием небольшого количества кислорода. В этом случае окисление субстрата идет не до конца и в качестве конечных про­дуктов образуются кислоты: уксусная, фумаровая, щавелевая, лимонная - и ряд других соединений. Часто такой тип окисления называют окисли­тельным брожением, что не совсем верно, так как брожение идет анаэроб­но, а при неполном окислении субстрата микроорганизмы используют ки­слород воздуха. Неполное окисление присуще следующим микрооргниз- мам: уксуснокислым бактериям, миксобактериям, разлагающим клетчатку и др., некоторым грибам, актиномицетам.

Спиртовое брожение. Спиртовое брожение вызывается дрожжевы­ми грибками. В процессе его молекула сахара сбраживается с образовани­ем этилового спирта и углекислого газа:

Спиртовое брожение идет в анаэробных условиях, тогда как размно­жение дрожжей лучше происходит при широком доступе кислорода. Оп­тимальные температурные условия для спиртового брожения - 30-35°С. Образующийся спирт вреден для дрожжей, и при накоплении его процесс брожения прекращается. Однако при высокой концентрации сахара в рас­творе дрожжи могут оставаться живыми в среде, содержащей до 15% спирта.

Молочнокислое брожение. Молочнокислое брожение вызывается молочнокислыми бактериями. В северных широтах возбудителем этого брожения являются в основном Streptococcus lactis, Lactobacillus lactis, а в южных районах - Lactobacillus bulgaricus (болгарская палочка).

В результате брожения лактоза (молочный сахар) или какой-либо другой сахар, например, глюкоза, разлагается с образованием молочной кислоты. Процесс идет с накоплением энергии в виде молекул АТФ. Мо­лочнокислое брожение суммарно может быть выражено уравнением:

Микроорганизмы, вызывающие молочнокислое брожение, по его ха­рактеру могут быть разделены на гомоферментативные, образующие из сахара только молочную кислоту (указанные выше виды), и гетерофермен- тативные, образующие, кроме молочной кислоты, другие продукты бро­жения: спирт, уксусную кислоту, углекислый газ (Lactobacillus plantarum, L. fermenti, Escherichia coli).

Маслянокислое брожение. При маслянокислом брожении происхо­дит распад углеводов до масляной кислоты, углекислого газа и водорода:

Маслянокислое брожение вызывается облигатными анаэробными бак­териями из рода Clostridium.

Разложение пектиновых веществ. Пектины — основа межклеточного вещества. Они входят также в состав оболочек растительных клеток.

Пектиновые вещества могут разлагаться особыми анаэробными бакте­риями до моносахаридов, которые затем сбраживаются ими до масляной кислоты. К этим бактериям относятся Clostridium pectinovorum, имеющая форму плектридия (барабанной палочки), и С. felsineum. Ниже приводятся уравнения разложения пектиновых веществ:

Анаэробное разложение клетчатки. Анаэробное сбраживание клет­чатки осуществляется почвенными целлюлозными бактериями, которые были выделены русским микробиологом В.Л. Омелянским. Бактерии были названы Вас. cellulosae methanicus, Вас. cell, hydrogenicus, а впоследствии Clostridium omelianskii.

Брожение происходит по типу маслянокислого. Под воздействием ферментов целлюлазы и целлобиазы бактерии последовательно гидроли­зуют клетчатку до целлобиозы и глюкозы; последняя сбраживается до масляной кислоты с выделением углекислого газа, водорода и метана:

Аэробное разложение клетчатки. Аэробное разложение клетчатки идет в поверхностных слоях почвы. Оно вызывается несколькими видами микроорганизмов: извитыми бактериями (Cellvibrio, Cellfalcicula), миксо- бактериями (Cytophaga, Sporocytophaga, Sorangium), некоторыми видами грибов и актиномицетов. Большинство этих микроорганизмов обладает ак­тивными ферментами, гидролизующими клетчатку. Первые этапы разложения клетчатки идут так же, как и у анаэробов, - до моносахаридов. Од­нако в результате неполного окисления при затрате небольшого количест­ва кислорода моносахариды разлагаются до органических кислот с выде­лением энергии. Дальнейшее окисление субстрата приводит к образова­нию углекислого газа и воды.

Уксуснокислые бактерии. Уксуснокислые бактерии окисляют эти­ловый спирт до уксусной кислоты и воды. Процесс аэробный, хотя его часто называют брожением. Он идет с накоплением значительного количе­ства энергии:

Известно несколько видов уксуснокислых бактерий, например: Acetobacter aceti, A. pasteurianum, A. xylinum.

Все уксуснокислые бактерии грамотрицательны, имеют форму па­лочек, часто слагающихся в цепочки, образуют на поверхности растворов характерные пленки, состоящие из полисахаридов.

Уксуснокислые бактерии окисляют спирт (вино, пиво) и другие продукты, содержащие алкоголь.

Ход работы

Спиртовое брожение. Для обнаружения углекислого газа приливают в пробирку небольшое количество баритовой или известковой воды, кото­рая от углекислого газа мутнеет, или пробирку с углекислым газом опус­кают в перевернутом виде в чашку с 10-процентным раствором щелочи; через 20-30 мин. в результате взаимодействия углекислого газа со щело­чью уровень жидкости в пробирке поднимается.

Для обнаружения спирта отливают в пробирку 10мл бродящей жидкости, приливают к ней 1-2 мл концентрированного раствора щелочи и подогревают до 60°С. Затем бросают несколько кристалликов металличе­ского йода и продолжают нагревать. В присутствии спирта выпадает жел­тый осадок йодоформа, который можно определить по запаху.

Суммарное уравнение реакции получения йодоформа:

Приготовить препарат дрожжей методом раздавленной капли, ок­расить метиленовым синим, зарисовать (рис. 11).

Молочнокислое брожение. Для обнаружения молочной кислоты, образовавшейся в результате деятельности молочнокислых бактерий, можно пользоваться такими качественными реакциями:

1. Перевод молочной кислоты в уксусный аль­дегид. Молочная кислота в кислой среде окисляется перманганатом ка­лия до уксусного альдегида, который с аммиачным раствором оксида се­ребра дает реакцию серебряного зеркала.

В коническую колбу через складчатый фильтр отфильтровывают 5 мл скисшего молока, добавляют 1 мл концентрированной серной кисло­ты, ставят на асбестовую сетку и нагревают до кипения, затем по каплям приливают 5 мл 5-процентного раствора перманганата калия КМп0₄. По­сле чего покрывают горлышко колбы фильтровальной бумагой, смоченной аммиачным раствором оксида серебра. Через некоторое время бумага чер­неет:

2. Проба с фенолом (реакция Уффельмана).10мл 5-процентного раствора фенола внести в пробирку и прибавить несколько капель слабого раствора хлорида железа (III), в результате получится интен­сивно окрашенный синий раствор. От одной-двух капель сыворотки кислого молока, содержащих молочную кислоту, он становится желтоватым.

3. Микроскопическое исследование микроорга­низмов гомоферментативного молочнокислого бро­жения. Наносят на чистое предметное стекло петлей каплю кислого мо­лока, делают мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют смесью спирта с эфиром (1 : 1), несколько раз обливая препарат этой смесью. При такой фиксации параллельно идет извлечение эфиром жира (капельки жи­ра мешают рассмотрению микроорганизмов). Фиксированный препарат окрашивают метиленовым синим в течение двух минут. Затем краситель смывают, просушивают препарат и рассматривают с иммерсией (рис. 18).

Под микроскопом можно обнаружить мелкие овальные или палоч­ковидные клетки, нередко соединяющиеся по 2,3 и более, - Streptococcus lactis, Lactobacterium acidophyllum.

2. Микроскопическое исследование бактерий гетероферментативного молочнокислого брожения.

На предметное стекло наносят небольшую каплю рассола кислой капусты или огурцов, готовят мазок, фиксируют его, красят фуксином, промывают, высушивают и рассматривают с иммерсией. Под микроскопом можно об­наружить мелкие равномерно окрашенные бесспоровые палочки Lactobacillus fermenti, L. plantarum, L. brassicum (рис. 19).

5 . Микроорганизмы, участвую­щие в порче кисломолочных про­дуктов. Берут пленку с поверхности кислого молока или сметаны, стоявших в теплом месте 3-5 дней. Можно взять также плесень с поверхности рассола квашеных овощей. Готовят препарат, растирая кусочек плесени в капле воды, и добавляют краситель (метиленовая синь, нейтральный красный), накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Хоро­шо видны крупные четырехугольные или овальные клетки молочной плесени Oidium lactis (рис. 20).

Этот гриб окисляет молочную кислоту до оксида углерода (IV) и воды, ухудшая качество скисшего молока.

Маслянокислое брожение. Для обнаружения углекислого газа С0₂, выделяющегося при маслянокислом брожении, к испытуемой жидкости приливают раствор гидроксида бария Ва(ОН)₂. Выпадает осадок карбоната бария. Наличие масляной кислоты в пробирке легко обнаружить по непри­ятному запаху прогорклого масла. Для обнаружения масляной кислоты проводят такую реакцию: наливают в пробирку 3-4 мл испытуемой жидко­сти, прибавляют к ней 0,5 мл 90-процентного спирта и 1-2 капли концен­трированной серной кислоты. Содержимое пробирки хорошо взбалтывают и нагревают. В присутствии масляной кислоты появляется характерный запах масляноэтилового эфира, напоминающий запах ананаса:

П ри микроскопическом исследовании бактерий маслянокислого брожения можно использовать метод висячей капли или метод фиксации с окраской фуксином. Каплю жидкости при приготовлении препарата берут стеклянной трубочкой или пипеткой со дна высокой пробирки (маслянокислое брожение происходит в анаэробных условиях). Один из главных возбудителей маслянокислого

брожения - бацилла Clostridium pasteurianum.

Эта подвижная палочка в период спорообра­зования приобретает форму веретена вследствие того, что спора образует­ся в середине клетки (рис. 21). Зарисовывают рассматриваемые бактерии.

Бактерии разложения пектиновых веществ. После брожения (по­становку см. в занятии 7) вынимают из пробирки снопики льна. Обнару­живают, что лубяные волокна легко отделяются от других тканей.

Готовят препарат живых бактерий Clostridium pectinovorum. Для этого пинцетом отжимают из снопика на предметное стекло каплю жидко­сти, окрашивают ее раствором йода, накрывают стеклом и рассматривают под микроскопом с иммерсионной системой. Бактерии Clostridium pectinovorum можно рассматривать при фиксации и окраске. Они имеют плектридиальную форму (рис. 22).

Бактерии анаэробного разложения клетчатки. Извлекают из бро­дильной жидкости фильтровальную бумагу. Пинцетом счищают с нее на предметное стекло каплю жидкости, приготавливают мазок, фиксируют,

о крашивают фуксином и рассматривают с иммерсионной системой. На препарате видны тонкие изогнутые палочки и плектридии целлюлозных бацилл, отдельные споры, а также микроорганизмы-спутники. Анаэробное разложение клетчатки в основном является результатом жизнедеятельно­сти Clostridium omelianskii. Это длинные тонкие палочки, слегка изогну­тые; на концах палочек - шаровидные споры, значительно превосходящие толщину клетки, т.е. бактерии имеют плектридиальную форму (рис. 23).

Бактерии аэробного разложения клетчатки. Рассматривают коло­нии микроорганизмов аэробного разло­жения клетчатки, выросших на фильтровальной бумаге в чашках Петри.

Вокруг комочков почвы можно видеть зоны, окрашенные в желтый, оранжевый, зеленый цвета, а также бесцветные зоны клетчатки, подвергшейся разрушению. Эти изменения свидетельствуют о развитии микроорганизмов, разлагающих клетчатку.

Из цветных колоний приготовляют мазок, фиксируют, окрашивают фуксином, рассматривают с иммерсионной системой, зарисовывают. На препарате, приготовленном из желтой слизистой влажной колонии, обнаруживается бактерия ро­да Cytophaga, относящаяся к группе целлюлозоразлагающих миксобактерий.

Кроме Cytophaga, в чашках Петри можно обнаружить колонии дру­гих миксобактерий - Sporocytophaga, Sorangium. Клетки этих бактерий вы­тянуты, иногда заострены на концах. Они способны образовывать микро­цисты, из которых формируются плодовые тела. При созревании из цист выходят молодые вегетативные клетки. Миксобактерии обладают способ­ностью к скользящим движениям по субстрату. Они интенсивно разлагают клетчатку.

К аэробам, разлагающим клетчатку, относятся также представители рода Cellvibrio. Клетки этой бактерии мелкие, слегка изогнутые. При раз­витии на субстрате некоторые виды этого рода образуют зеленый и жел­тый пигменты, которые окрашивают бумагу в соответствующие цвета.

Кроме этих бактерий, в разложении клетчатки принимают активное участие Cellfalcicula viridis, клетки которой имеют палочковидную форму с заостренными концами или веретенообразную. При развитии этой бакте­рии на фильтрованной бумаге возникают зеленые пятна.

Аэробно разлагают клетчатку также некоторые грибы (из родов Fusarium, Aspergillus и др.) и актиномицеты.

Уксуснокислые бактерии - бесспоровые грамотрицательные мало­подвижные палочки. Они растут и размножаются на поверхности пита­тельных сред, образуя тонкие пленки, так как являются облигатными аэро­бами. Acetobacter xylinum образует более толстые и плотные пленки, так как клеточные оболочки этих бактерий содержат в своем составе целлюлозу. При неблагоприятных условиях клетки уксусно­кислых бактерий разрастаются, принимая необычную (инволюционную) форму утолщенных длинных нитей.

Д ля обнаружения в питательной среде уксусной кислоты 5 мл скисшего пива наливают в пробирку, добавляют неболь­шое количество соды и раствор хлорида железа (III). В присутствии уксусной кис­лоты при нагревании появляется темно­красное окрашивание ацетата железа:

Рассматривают образовавшуюся в колбе пленку, в которой обычно можно найти: a) Acetobacter aceti - короткую неподвижную палочку, обра­зующую гладкую слизистую пленку, желтеющую от раствора йода (рис. 24); б) Acetobacter pasteurianum, которая образует сухую морщинистую пленку, поднимающуюся по стенкам колбы и окрашивающуюся раствором йода в синий цвет; в) Acetobacter xylinum, образующую толстую, слизи-

Рассматривают образовавшуюся в колбе пленку, в которой обычно можно найти: a) Acetobacter aceti - короткую неподвижную палочку, обра­зующую гладкую слизистую пленку, желтеющую от раствора йода (рис. 24); б) Acetobacter pasteurianum, которая образует сухую морщинистую пленку, поднимающуюся по стенкам колбы и окрашивающуюся раствором йода в синий цвет; в) Acetobacter xylinum, образующую толстую, слизистую пленку. Приготавливают мазок, окрашивают его раствором йода и рассматривают под микроскопом.

Для знакомства с уксуснокислыми бактериями можно приготовить препарат из пленки чайного «гриба», состоящей из уксуснокислых бакте­рий и одного из видов дрожжей (Candida), живущих в симбиозе с бакте­риями.

Как известно, чайный «гриб» растет на растворе сахара. Дрожжи сбраживают сахар до этилового спирта, а уксуснокислые бактерии окис­ляют спирт до уксусной кислоты.

Делают мазок из пленки чайного «гриба», препарат фиксируют, ок­рашивают раствором йода и рассматривают под микроскопом. На препара­те видны палочки, собранные в цепочки Acetobacter xylinum, и округлые клетки дрожжей.

Можно рассматривать препарат методом раздавленной капли.

Отчет о выполненной работе должен содержать рисунки всех изу­ченных микробов и записи уравнений реакций.

Контрольные вопросы

1. Какие микроорганизмы вызывают спиртовое брожение?

2. Какими способами можно обнаружить спирт и углекислый газ при спиртовом брожении?

3. Какие микроорганизмы вызывают молочнокислое и маслянокис­лое брожение?

4. Каким способом можно обнаружить молочную кислоту?

5. Как можно обнаружить масляную кислоту в культуральной среде?

6. Какие микроорганизмы вызывают процессы анаэробного разложе­ния клетчатки?

7. Как протекает процесс разложения пектиновых веществ? Напиши­те уравнения реакции.

8. В чем практическое значение процессов разложения пектиновых веществ?

9. В чем особенности жизнедеятельности чайного «гриба»?