- •Міністерство освіти і науки, молоді та спорту України
- •“Ефекту надекспресії гена fps1 на стійкость клітин дріжджів до ізобутилового спирту та інших спиртів”
- •1. Загальна інформація про організацію – базу проходження практики
- •2. Інформація про функції, структуру та організацію роботи біохімічної лабораторії, її забезпечення реактивами, матеріалами та обладнаннями
- •3. Опис виконання практики згідно з календарним планом
- •5. Матеріали і методи досліджень [6, 8]
- •5.1. Матеріали досліджень
- •5.2. Методи досліджень.
- •5.2.1. Електротрансформація e.Coli dh5α
- •5.2.2. Виділення плазмідної днк з клітин e.Coli
- •5.2.3. Електрофорез днк в агарозному гелі
- •5.2.4. Розщеплення днк ендонуклеазами рестрикції
- •5.2.5. Трансформація дріжджів з використанням літій ацетату і поліетиленгліколю
- •5.2.6. Полімеразна ланцюгова реакція (плр)
- •5.2.7. Довготривале зберігання бактерійних та дріжджових трансформантів
- •5.2.8. Виділення тотальної днк з клітин дріжджів
- •5.2.9. Лігування днк-вставки з днк-вектором.
- •5.2.10. Елюція фрагментів днк з гелю.
- •6. Результати та їх обговорення
- •7. Пропозиції кафедрі біохімії з покращення підготовки студентів як спеціалістів
- •Висновки
7. Пропозиції кафедрі біохімії з покращення підготовки студентів як спеціалістів
Кафедра біохімії здійснює хорошу підготовку спеціалістів забузпечує відповідну теоретичну базу та здобуття практичних навичок, які дозволяють брати участь у наукових дослідженнях.
Висновки
В результаті проведеної роботи було:
Сконструйовано плазміду для надекспресії гена гена FPS1.
Одержано трансформанти дріжджів S. cerevisiae, що надекспресують FPS1.
Показано, що одержані трансформанти чутливіші до гіперосмотичного шоку, ніж до гіпоомотичного.
Показано, що одержані трансформанти стійкіші до ізобутанолу, етанолу та ізопропанолу, ніж вихідний штам.
Досліджено кінетику росту штамів S. cerevisiae, що надекспресують FPS1, та показано, що вони стійкіші до ізобутанолу у рідкому середовищі у порівнянні з вихідним штамом.
Література
Atsumi, S. Non-fermentative pathways for synthesis of branched-chain higher alcohols as biofuels. // Atsumi S, Hanai T, Liao JC. // Nature. – 2008. – Vol. 451(7174), pp. 86-9.
Fps1, a yeast member of the MIP family of channel proteins, is a facilitator for glycerol uptake and efflux and is inactive under osmotic stress. // Luyten K. et al. // EMBO J. – 1995. – Vol. 14(7), pp. 1360-71.
Fps1p controls the accumulation and release of the compatible solute glycerol in yeast osmoregulation. // Tamás MJ et al. // Mol Microbiol. – 1999. – Vol. 31(4), pp. 1087-104.
Genome-wide identification of Saccharomyces cerevisiae genes required for maximal tolerance to ethanol. // Teixeira MC et al. // Appl Environ Microbiol. – 2009. – Vol. 75(18), pp. 5761-72.
Herrera, S. Bonkers about biofuels. // Herrera, S. // Nat Biotechnol. - 2006. – Vol. 24(7), pp. 755-60.
Maniatis, T. Molecular cloning: a laboratory manual // T. Maniatis, E.F. Fritsch, J. Sambrook. // Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory. – 1982. 545 p.
Mollapour, M. Hog1 mitogen-activated protein kinase phosphorylation targets the yeast Fps1 aquaglyceroporin for endocytosis, thereby rendering cells resistant to acetic acid. // Mollapour M, Piper PW // Mol Cell Biol. – 2007. – Vol. 27(18), pp. 6446-56.
Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. // Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж // - М.: Мир, 1984 ред и доп.