34.Нагрузочные реакции агглютинации

Ставится для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, риккетсий и вирусов, иммунные комплексы которых с агглютининами в обычных классических РА увидеть не удается, или же для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперсным веществам и мельчайшим микроорганизмам.РНГА для серодиагностики инфекционных болезней. Используя РНГА для обнаружения антител в сыворотках больных, готовят эритроцитарные антигенные диагностикумы. Для этого эритроциты обрабатывают 15 мин раствором танина в разведении 1:20 000–1:200 000, что придает им устойчивость и повышает адсорбционную способность. Затем их смешивают с известным антигеном и инкубируют в течение 2 ч при температуре 37С.. Сенсибилизированные антигеном эритроциты 2–3 раза отмывают 0,85 % раствором натрия хлорида и в количестве 0,10– 0,25 мл 0,5 % взвеси добавляют к сыворотке, разведенной от 1:10 до 1:1280 и разлитой по 0,25–0,50 мл в луночки плексигласовых панелей. Контролем служат взвеси интактных и нагруженных антигеном эритроцитов, которые вносят в сыворотки, дающие заведомо положительную и отрицательную реакции.Результаты реакции учитывают через 2 ч после инкубации в термостате и оценивают плюсами: «++++» – эритроциты равномерно покрывают всю лунку пластинки в виде зонтика с неровными краями; «+++», «++» –осадок эритроцитов в виде зонтика, в центре небольшое кольцо из осадка эритроцитов в виде зонтика, в центре небольшое кольцо из несклеивающихся эритроцитов; «+» – в основном несклеивающиеся эритроциты; «–» – скопление эритроцитов в виде маленького диска («пуговицы»).Реакцию коагглютинации применяют для определения антигенов с помощью антител, адсорбированных на белке А клеток.Является одним из вариантов пассивной, т. е. опосредованной клетками-носителями антител, ускоренной реакции агглютинации на стекле. В основу этой реакции положено уникальное свойство золотистого стафилококка, имеющего в составе своей клеточной стенки белок А, связываться с Fc-фрагментами IgG и IgM. При этом активные центры антител остаются свободными и могут взаимодействовать со специфическими детерминантами антигенов. На предметное стекло наносят каплю 2%-ной взвеси стафилококков, сенсибилизированных соответствующими антителами, и добавляют каплю взвеси исследуемых бактерий. При соответствии антигена антителам через 30—60 с происходит четкая агглютинация нагруженных антителами стафилококков.

Латекс-агглютинация — агглютинация антителами частиц латекса, на повер-ти кот адсорбирован АГ или гаптен; феномен Л.-а. используется при иммунол-их исследованиях. Основным условием успешной постановки ЛАГ является строгое соблюдение колич-ых соотношений компонентов системы: к 50 мкл исследуемого материала добавляют 10 мкл латекс-препарата, сенсибилизированного антителами. Специфичность ЛАГ контролируют с помощью трех контрольных тестов: заведомо положительная реакция, заведомо отрицательная реакция и контроль качества латекс-суспензии по ЛАГ-несенсибилизированным латексам с исследуемым материалом. В качестве носителей специфических антител используют полистироловые монодисперсные латексы с разным диаметром частиц (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 мкм). ЛАГ испол для быстрого обнар-ия м/о или их АГ в исследуемом матер-ле.