35.Реакция преципитации

Реакцией прец-ии (РП) наз-ся осажд-ие из рас-ра АГ при возд-ии на него иммун-ой сыв-ки и электролита. Посредством РП можно выявить АГ в развед-ях 1:100 000 и даже 1:1 000 000, т. е. в таких малых колич-ах, кот не обнар-ся хим путем.Постановка РП Асколи. В узкую пробирку диаметром 0,5 см с неразведенной преципитирующей сывороткой в количестве 0,3–0,5 мл, держа ее в наклонном положении, пастеровской пипеткой с тонко оттянутым капилляром медленно по стенке наслаивается такой же объем антигена. Чтобы не смешать две жидкости, пробирку осторожно ставят вертикально. При положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом через 5–10мин появляется серовато–белое кольцо. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.Реакция Асколи применяется для идентификации сибиреязвенного, туляремийного, чумного антигенов. Недостатком этой РП является нестойкость преципитата,который исчезает даже при легком встряхивании. Кроме того, с ее помощью нельзя определить количественный состав антигенов, участвующих в формировании преципитата.Реакция преципитации Оухтерлони. Реакцию ставят на чашках Петри в лунках агарового геля. В качестве геля используют хорошо отмытый прозрачный 1% агар. Антигены и сыворотки вносятся з агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии. Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитело и антиген образуют через 24 – 48 ч иммунный комплекс в виде белой полосы (рис. 30, б). При наличии сложного по составу преципитиногена возникает несколько полос. При этом полосы серологически родственных антигенов сливаются воедино, а полосы разнородных перекрещиваются, что позволяет определить детали антигенной структуры исследуемых веществ. Широко используется для диагностики заболеваний, вызываемых вирусами и бактериями, продуцирующими экзотоксины.Иммуноэлектрофорез(ИЭФ):Представляет собой сочетание электрофореза в геле с иммунодиффузией.Сначала проводят электрофоретическое разведение белков в забуференном агаровом геле.Затем в канавку вносят преципитирующую иммунную сыворотку.антигены и антитела диффундируют в геле навстречу друг другу, в месте их взаимодействия образуются дугообразные линии преципитации , количество,расположение и форма которых дают представление о составе исх. смеси антигенов. С помощью ИЭФ успешно анализируются Белки сыворотки крови, спинномозговой жидкости.В клин. практике используются при диагностике иммунодефицитных состояний.О состоянии гуморального иммунитета судят на основании определения в сыворотке количества основных классов иммуноглобулинов. Исследование выполняют с помощью специальных иммунных сывороток, полученных против тяжелых цепей (Н) каждого класса иммуноглобулинов. Указанные сыворотки добавляют к агару, на котором производят исследование. Определение количества иммуноглобулинов осуществляют с помощью метода радиальной иммунодиффузии (Манчини и др., 1963—1965). При избытке антител в агаре складываются линейные отношения между концентрацией антигена в испытуемой сыворотке и размером преципитата. При этом диаметр Кольца преципитата, образующегося при внесении в лунку испытуемой сыворотки, находится в определенной зависимости от количества содержащегося там антигена. Пересчет линейной величины диаметра кольца преципитата производят по специальным таблицам или расчетным кривым. Количество иммуноглобулинов выражают в г/л или в международных единицах (ME).