Выделение веществ основного характера из биологических жидкостей

Выделение проводится из объекта, подщелоченного 25% раствором аммиака до рН 10, по методике, описанной для веществ кислотного, нейтрального и слабоосновного характера.

Схема ТСХ-скрининга веществ основного характера

Условия исследования:

Пластинки «Сорбфил» - силикагель, закреплённый на полимерной подложке силиказолем. Система растворителей - диоксан:хлороформ:ацетон:25% раствор NH₃ (23,5:22,5:2,5:1,5). Время насыщения камеры - 20 минут. Высота подъёма фронта растворителей - 8 см.

Реагенты для обнаружения:

1. 16% раствор серной кислоты с формальдегидом - фенотиазины, усиление флуоресценции хинина;

2. Реактив Марки (прокапывание) - фенотиазины (усиление окраски), димедрол, алкалоиды опия;

3. Реактив Драгендорфа - общий реагент на азотсодержащие вещества основного характера.

Методика исследования

В зоны А и С точками наносят по 1/2 части аликвоты А_О (методика подготовки пробы аналогична приведенной для веществ кислотного характера). В зону В наносят в точку 1-2 метчика, причём аминазин - обязательно. В зону D наносят полосой аликвоту B_O. После хроматографирования пластинку подсушивают. Зоны А и В обрабатывают серной кислотой с формальдегидом. Наблюдают окраску и флуоресценцию при 366 нм. Затем обрабатывают зоны А и В реактивом Драгендорфа, а зону С прокапывают реактивом Марки. Отмечают окраску, копируют пластинку и определяют значения R_f и R_S (по аминазину). С зоной D поступают также, как и с зоной Е для веществ кислотного характера.

 4; 8.

1.4.2. Флуориметрическое определение хинина в биожидкостях

В пенициллиновый флакон с анализируемой пробой (слой сорбента из соответствующей области зоны D хроматограммы для веществ основного характера - см. «ТСХ-скрининг») прибавляют 10 мл 0,01 М раствора серной кислоты, встряхивают 5 минут и фильтруют в пенициллиновый флакон. В качестве стандарта используют раствор хинина с концентрацией 1 мкг/мл. Измеряют интенсивность флуоресценции анализируемого и стандартного растворов. Концентрацию хинина в мкг/мл в анализируемой биожидкости рассчитывают по формуле:

где I_Х - интенсивность флуоресценции анализируемого раствора;

где I_СТ - интенсивность флуоресценции стандартного раствора.

 4.

1.4.3. УФ-спектрофотометрическое определение барбитуратов в биологических жидкостях

В пенициллиновый флакон с анализируемой пробой (слой сорбента из соответствующей области зоны E хроматограммы для веществ кислотного и слабоосновного характера - см. «ТСХ-скрининг») прибавляют 10 мл воды очищенной. Встряхивают 5 минут. Фильтруют в пенициллиновый флакон. В кювету спектрофотометра с толщиной слоя 1 см помещают полученный фильтрат и добавляют 3 капли 0,2 М H₂SO₄. Перемешивают. Измеряют оптическую плотность раствора при 240 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную. Затем в кювету с анализируемым раствором прибавляют 3 капли 30% спиртового раствора NaOH, перемешивают и измеряют оптическую плотность. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную. Аналогично измеряют оптическую плотность стандартного раствора барбитала с концентрацией 10 мкг/мл. Концентрацию барбитуратов (мкг/мл) в анализируемой биологической жидкости рассчитывают по формуле:

где и - оптические плотности щелочного (кислого) анализируемого раствора; и - оптические плотности стандартного раствора.

 4; 9.