1.5. Определение карбоксигемоглобина в крови
1.5.1. Лабораторная диагностика отравлений оксидом углерода (II) с применением химических реакций
Для обнаружения карбоксигемоглобина в крови проводят следующие химические реакции:
Реакция с раствором NaOH (проба Гоппе-Зейлера)
К 5 каплям крови прибавляют равный или двойной объём 30% раствора гидроксида натрия. Кровь, содержащая карбоксигемоглобин, остаётся ярко-красной, а кровь, не содержащая карбоксигемоглобина, буреет.
Гнилостно изменённая кровь под влиянием щелочи может приобретать ярко-красную окраску и в отсутствие карбоксигемоглобина за счёт образования гемохромогена.
Реакция с K3[Fe(CN)6] (проба Бюркера)
К 1 капле крови прибавляют 5 мл воды и взбалтывают. Прибавляют 5 капель 1% раствора K3[Fe(CN)6]. Кровь, содержащая карбоксигемоглобин, остаётся алой, а кровь, не содержащая карбоксигемоглобина, становится желтоватой.
Реакция с CuSO4 (проба Залесского)
К 2 каплям крови прибавляют 5 мл воды и хорошо взбалтывают. К полученному раствору прибавляют 5 капель 10% раствора сульфата меди. Смесь снова хорошо взбалтывают. Кровь, содержащая карбоксигемоглобин, становится пурпурно-красной, а кровь, не содержащая карбоксигемоглобина, приобретает зеленоватую окраску.
Заключение о наличии карбоксигемоглобина в крови не должно базироваться на результате только одной из перечисленных реакций. Его можно делать лишь по результатам всех или большинства данных реакций. С помощью перечисленных реакций нельзя обнаружить малые количества карбоксигемоглобина в крови. Известны и другие химические реакции обнаружения карбоксигемоглобина.
2; 9.
1.5.2. Количественное определение карбоксигемоглобина спектрофотометрическим методом
0,5 мл анализируемой крови помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 15-20 мл фосфатного буферного раствора (рН 7,4), взбалтывают и доводят фосфатным буферным раствором до метки. При необходимости раствор крови фильтруют (раствор 1). Необходимое количество раствора 1 помещают в 1 см кювету спектрофотометра и прибавляют к нему несколько кристалликов дитионита натрия (раствор 2). Измеряют оптическую плотность раствора при длинах волн 538 (А1) и 550 нм (А2).
10 мл раствора 1 насыщают оксидом углерода (II) в течение 5 минут в аппарате для получения СО. Затем прибавляют несколько кристалликов дитионита натрия (Na2S2O4) и вновь насыщают в течение 5 минут. Необходимое количество полученного раствора крови помещают в 1 см кювету и измеряют оптическую плотность при 538 нм (А3). Раствором сравнения служит вода очищенная.
Расчёт содержания карбоксигемоглобина в исследуемой крови в % производят по формуле:
,
где К - коэффициент 0,372
2; 4; 5.
2. Ситуационные задачи
2.1. Группа веществ, изолируемых из биоматериала перегонкой с водяным паром
Задача № 1
На судебно-химическое исследование доставлены: кровь (10 мл), моча (10 мл), желудочно-кишечный тракт (500 г).
Краткие обстоятельства дела: гражданин К. вечером был доставлен товарищем домой в состоянии сильного опьянения. Предъявил жалобы на тошноту, головную боль, мышечную слабость, головокружение. Через 30 минут потерял сознание. Смерть наступила по дороге в больницу в машине скорой помощи от острой недостаточности дыхания.
Цель исследования: провести судебно-химическое исследование на этанол и суррогаты.
Задача № 2
На судебно-химическое исследование доставлены желудочно-кишечный тракт (500 г), сальник (100 г).
Краткие обстоятельства дела: гражданин П. в гараже снимал лакокрасочное покрытие органическими растворителями, через 6 часов он был найден женой в гараже в бессознательном состоянии. Вызванная бригада скорой помощи констатировала расстройство сосудодвигательного порядка (ярко-красный цвет лица, шеи, ногтей, синюшность губ). Пострадавший скончался в больнице на вторые сутки при нарастающих симптомах печёночно-почечной недостаточности.
Цель исследования: провести судебно-химическое исследование на хлорсодержащие органические растворители.
Задача № 3
На судебно-химическое исследование доставлены 10 мл крови, 20 мл мочи, желудок 500 г, кишечник 500 г, печень 200 г, 0,5 мл вишнёвой настойки.
Краткие обстоятельства дела: пострадавший гр. М. принял 300 мл вишнёвой настойки пятилетней выдержки. Внезапно у него появилось головокружение, сердцебиение и одышка, сопровождающаяся комой, судорогами, остановкой дыхания и сердца.
Цель исследования: провести судебно-химическое исследование на вещества, изолируемые перегонкой с водяным паром.
Задача № 4
На судебно-химическое исследование доставлены: сальник 200 г, печень 200 г, моча 20 мл, кровь 10 мл, почки 100 г.
Краткие обстоятельства дела: гражданин М. при аварии реактора фенолформальдегидных пластмасс попал в среду, содержащую высокую концентрацию паров реакционной смеси. В бессознательном состоянии потерпевший был доставлен в больницу, где скончался через сутки при нарастающих признаках острого токсического отёка лёгких и токсической недостаточности почек.
Цель исследование: провести судебно-химическое исследование на вещества, изолируемые перегонкой с водяным паром и используемые для синтеза фенолформальдегидных пластмасс.
Задача № 5
На судебно-химическое исследование доставлены: печень 500 г, почки 200 г, моча (из мочевого пузыря 20 мл), кровь 200 мл.
Краткие обстоятельства дела: гражданин Р., находящийся на учёте в наркологическом диспансере, был доставлен в больницу в бессознательном состоянии, где и скончался спустя 10 часов от угнетения центра дыхания.
Цель исследование: провести судебно-химическое исследование на ацетон и хлороформ.
Задача № 6
На судебно-химическое исследование доставлены: печень 500 г, желудочно-кишечный тракт 500 г, кровь 10 мл, моча 20 мл.
Краткие обстоятельства дела: в районе автовокзала обнаружен труп мужчины 20-25 лет. При осмотре телесных повреждений не обнаружено.
Цель исследование: провести общее судебно-химическое исследование на вещества, изолируемые перегонкой с водяным паром.
Задача № 7
На судебно-химическое исследование доставлены: кровь 10 мл, моча 20 мл, печень 200 г, почки 100 г.
Краткие обстоятельства дела: в токсикологическое отделение городской больницы доставлена женщина в бессознательном состоянии. Несмотря на проводимые лечебные мероприятия женщина скончалась. Со слов сестры пострадавшая накануне была очень расстроена и выпила 100-150 мл какой-то жидкости (этикетка на бутылке отсутствует).
Цель исследования: провести общее судебно-химическое исследование на «летучие» яды.
Задача 8
На судебно-химическое исследование доставлены: желудок 500 г, печень 500 г, почки 200 г, кровь 10 мл, моча (из мочевого пузыря 10 мл).
Краткие обстоятельства дела: гражданин Б. дежурил в кочегарке. Ночью захотел пить и увидел на подоконнике кружку с какой-то жидкостью. Попробовав на вкус, решил, что это кисель, и выпил полную кружку (300 мл). Через 6 дней наступила смерть от тяжёлого отравления.
Цель исследования: провести судебно-химическое исследование на этиленгликоль.
Задача № 9
На судебно-химическое исследование доставлены: кровь 20 мл, желудок с содержимым 500 г, моча 20 мл, головной мозг 150 г, почка 100 г, печень 200 г.
Краткие обстоятельства дела: гражданин М. в нетрезвом состоянии вошел в складское помещение, где хранились средства для дезинфекции и, опрокинув ведро с неизвестной жидкостью, лёг спать на полу. Через 3 часа был обнаружен в бессознательном состоянии, лежащим в луже неизвестной жидкости с неприятным запахом, и немедленно доставлен в больницу. При поступлении общее состояние крайне тяжёлое, кожные покровы бледные, сознание отсутствует, давление не определяется. Кожа на ягодицах на участке 20х30 см ярко-розового цвета со слущенным эпидермисом (химический ожог). Через 2 часа после поступления в больницу пострадавший умер.
Цель исследования: провести судебно-химическое исследование на фенол и крезолы.