Приготування препаратів живих клітин

Живі мікроор­ганізми можна спостерігати в препаратах «роздавлена» і «висяча крапля». Для приготування препаратів у вигляді «роздавленої краплі» на середину чистого предметного скла нанести малень­ку краплю води, перенести в неї невелику кількість досліджува­них мікроорганізмів, добре перемішати і накрити покривним склом. Якщо досліджувані мікроорганізми ростуть на щільному поживному середовищі, мікробну масу перенести у підготовле­ну краплю води за допомогою петлі, якщо в рідкому середови­щі — суспензію клітин нанести на предметне скло стерильною піпеткою або за допомогою петлі, краплю води на предметне скло можна не наносити. Крапля з досліджуваним матеріалом має бути невеличкою, щоб після притискання її покривним склом з-під останнього не виступала зайва рідина. Зайву рідину видалити фільтрувальним папером. Підготовлений препарат помістити на столик мікроскопа, закрити затискачами. Препа­рат «роздавлена крапля» допомагає встановити форму, розміри клітин, їх розмноження, рухомість, наявність спор, реакцію клі­тин на хімічні подразники.

Для приготування препарату «висяча крапля» невелику краплю суспензії мікроорганізмів нанести на покривне скло, пе­ревернути його краплею донизу і помістити на спеціальне пред­метне скло із заглибленням у центрі. Краї заглиблення заздале­гідь змастити вазеліном. Крапля має висіти вільно, не торкаю­чись країв і дна заглиблення. Це дозволяє її вивчати впродовж кількох днів, спостерігаючи за ростом і розмноженням мікроор­ганізмів, утворенням і проростанням спор, рухомістю клітин.

Препарат «відбиток» готують для вивчення природного роз­ташування в колонії клітин стрептоміцетів і міцеліальних гри­бів. Зі щільного середовища, на якому мікроорганізми ростуть суцільним газоном у вигляді колоній, вирізують скальпелем не­великий кубик або окрему колонію і переносять на предметне скло. Поверхня з мікроорганізмами має бути обернена догори. Потім прикладають чисте покривне скло, злегка надавлюють на нього петлею або голкою і негайно ж знімають, намагаючись не зрушити убік. Препарат поміщають відбитком вниз у краплю води або в розчин метиленової сині (1:40) на предметному склі і мікроскопують.

Фарбування живих клітин. Для виявлення деяких функціо­нальних особливостей клітин і диференціації їхніх включень за­стосовують прижиттєве фарбування мікроорганізмів. Через токсичність барвників живі клітини фарбують нейтральним червоним, нейтральним фіолетовим, метиленовою синню, фук­сином, еозином, еритрозином, зеленим янусом у дуже невели­ких (0,001—0,0001%) концентраціях. На предметному склі краплю досліджуваних мікроорганізмів змішують із краплею розчину барвника, накривають покривним склом і через 2–3 хв мікроскопують.

Уявлення про природну форму, величину, будову мікроор­ганізмів, їхні окремі структури (позаклітинний слиз) дають не­гативні препарати. Для негативного фарбування застосовують рідку туш, 3 %-й водний розчин конго червоного, 10 %-й розчин нігрозину й інші барвники, що не проникають у мікробні кліти­ни. Краплю туші або розчину барвника змішують із краплею культури, накривають покривним склом і розглядають із сухи­ми об'єктивами. Барвники заповнюють простір, що оточує клі­тину, і в результаті незабарвлені мікроорганізми чітко виділяються у вигляді яскраво освітлених безбарвних капсул на тем­ному тлі препарату. Можна застосувати комбіноване негативне фарбування фону з прижиттєвим фарбуванням клітин.