Гипотетическая модель связывания агонистов и антагонистов с дофаминовыми рецепторами передней доли гипофиза свиней
Приведенные данные о дофаминергических механизмах позволяют считать, что Д,-рецепторы сопряжены с аденилатцик-лазой, стимулируемой дофамшюм при участии ГТФ, а Д^рецепторы сопряжены с ингибированием аденилатциклазы также при участии ГТФ.
Д3-рецепторы в настоящее время наиболее хорошо изучены в ЦНС, где они являются мишенью для атшшчных пейролеп-тиков [Sokoloff Т., Yicos В., Martres M.P. et al., 1990]. В основном, они локализуются в лимбической системе [Giros В. 1991]. Д^рецепторы, располагаясь пресинаптически, модулируют высвобождение дофамииа. Их активация ингибирует выход до-фамина. +Aj76 и (+)-ИН232-селективные антагонисты Д3-ауто-реценторов стимулируют синтез, высвобождение и метаболизм дофамина зависимо от концентрации внеклеточного Са2+. AJ76 стимулирует ионные токи. Рецепторы, регулирующие синтез дофамииа и его освобождение, относятся к разным подтипам Д3-рецепторов [Yamaguchi I., Walk S.F., Jose P.A., Felder R.A. 1996]. По мнению Р.Р.Гайнетдинова и др. роль Д3-ауторецеп-торов заключается преимущественно в регуляции пресинапти-ческого выделения дофамина [Gainetdinov R.R., Sotnkova T.D., Grecova T.V. 1995].
Клонирован ген, кодирующий Д5 -рецепторы. мРНК Д5-ре-цеитора найдена в мозге, почках, печени, щитовидной железе. Антитела к Д5-рецепторам метят нейроны хвостатого ядра, пирамидальные, снинальные нейроны [Bergson С., Mrzljak H., Lidow M.S., Coldman-Rakic P.S. 1995]. Активация Д5-рецептора стимулирует активность аденилатциклазы через ГТФ-связываю-щий белок [Sunahara R.K., Guan H.C., et al., 1991].
Таким образом, все пять подтипов дофаминовых рецепторов сопряжены с ГТФ-связывающими белками и все они представляют собой белковую альфа-спираль, состоящую из 7 доменов. Семейство рецепторов Д, (Д, и Д5) характеризуется локализацией в полосатом теле и коре головного мозга (Д() и в гиппокампе и гипоталамусе (Д5); при стимуляции этих рецепторов увеличивается уровень цАМФ, повышается гидролиз фосфоинозитолдифосфата, происходит мобилизация кальция и активация протеинкиназ (данные рецепторы имеют длинную внутриклеточную С-коицевую часть). Семейство Д2-рецепторов (Д2, Д3 и Д4) характеризуется локализацией в полосатом теле, черной субстанции и гипофизе (Д2), в гип-иокамие, зрительном бугре и п. accumbens (Д3) и коре головного мозга, мозжечке и среднем мозге (Д4); при стимуляции этих рецепторов уменьшается уровень цАМФ, увеличивается калиевая проницаемость плазматических мембран и снижается потенциал-зависимый ток ионов кальция (данные рецепторы имеют короткую внутриклеточную С-коицевую часть).
Периферические дофаминовые рецепторы структурно и функционально сходны с центральными [Kujacie M., Sensson K.,etal., 1991].
3.6. Солюбилизация ______дофаминовых рецепторов_____
Как Д2-, так и Д3-рецепторы можно солюбилизировать с помощью 1% дигитонина [Modras В.К. et al., 1980; Davis A. et al., 1982].
B.K.Madras и соавт. (1982) выделили с помощью дигитонина и гель-фильтрации па колонке с сефадексом G-50 Д2-рецеп-торы из полосатого тела человека, теленка и собаки. Солюбилизированные Д2-рецепторы человека и собаки связывали 3Н-сшшероп с примерно одинаковой Кд; причем при солюбилизации связывающая способность этих рецепторов не менялась. В то же время солюбилизация Д2-рецепторов полосатого тела теленка приводит к снижению специфического связывания ими спиперона или хлорпромазина в 12 раз. Авторы делают вывод, что вследствие сходства с Д2-рецепторами человека и стабильности в растворе Солюбилизированные рецепторы собаки представляют собой адекватную модель для изучения физико-химических свойств дофамиповых рецепторов.
A. Davis и соавт. (1982) с помощью такой же методики солю-билизировали Д3-рецепторы, связывающие 3Н-дофамин, из мембран клеток полосатого тела головного мозга собаки; при этом Кд связывания 3Н-дофамина увеличивали с 1,2 до 3,4 нМ.
Д3-Рецепторы солюбилизируются в меньшей степени, чем Д2-рецепторы, что может быть связано с меньшей лабильностью по отношению к дигитонину или меньшей гидрофобио-стыо. Кроме того, Д2- и Д3-рецепторы имеют различную температурную чувствительность [Lew J.Y., Goldstein M., 1979] и неодинаково алкилируются [Titeler M., 1980]. '
Различие рецепторов, связывающих 3Н-спироперидол и JH-дофамии, подтверждено в работе Y.Yamamoto (1982). Оказалось, что марганец увеличивает специфическое связывание
JH-Дофамина (на 300%), но не 3Н-спироперидола с рецепторами головного мозга крыс. При солюбилизации дофаминовых рецепторов в отсутствии маргшща их молекулярная масса равнялась 200 000 (радиус Стокса 560 нМ), а в присутствии марганца -400 000 дальтон (радиус Стокса 6,1 нМ). Причем марганец был обнаружен в той же фракции, что и солюбилизированный рецептор. В то же время молекулярная масса солюбилизированных рецепторов, связывающих 3Н-спироперидол, равнялась 120 000 (радиус Стокса 4,3 нМ) как без, так и с марганцем.
Таким образом, Д2- и Д3-рецепторы представляют собой различные биомолекулы и могут быть разделены физико-химическими методами. Сведений о солюбилизации Д, и Д4-рецеп-торов мы не встретили.