Задания

1. Знакомство с различными помещениями микробиоло­гических лабораторий (бактериологическая, вирусологиче­ская лаборатории, препараторская, автоклавная, моечная и др). Правила охраны труда и техники безопасности для работающего персонала.

Методика приготовления препаратов (мазков) и простые способы окраски. Морфология и строение бактерий (изучение основных форм)

Методика приготовления препаратов (мазков) и простые способы окраски

Приготовление мазков, их окраска и другие микробиоло­гические операции следует проводить на заранее органи­зованном рабочем месте. На рабочем столе могут находить­ся только материалы и предметы, необходимые для данного исследования: изучаемый объект (кровь, гной, мокрота, фе­калии и др.), пробирки или чашки с культурой микробов, стерильная вода или изотонический раствор (0,85% раствор хлористого натрия в дистиллированной воде), штатив для пробирок, бактериологическая петля, банки с чистыми обезжиренными предметными стеклами и карандаши по стеклу. Помимо этого, необходимы: газовая горелка или спиртовка, растворы красителей, ванночка с подставкой (мостик) для стекол, промывалка с водой, пинцет, фильтро­вальная бумага, банка с дезинфицирующим раствором, ис­пользуемым с целью обезвреживания отработанных препа­ратов и пипеток.

Существуют различные методы обработки стекол. Новые стекла кипятят в 1% растворе соды, промывают водой, по­мещают в слабый раствор соляной кислоты, после чего окон­чательно промывают водой. Стекла, бывшие в употреблении, очищают разными способами. Их помещают в концентри­рованную техническую серную кислоту на 2 часа или в смесь, состоящую из 100 частей серной кислоты и 50 частей двухромовокислого калия, на 1000 частей воды, тщательно промывают водой, кипятят в растворе соды или едкой ще­лочи, затем снова промывают водой, вытирают обезжирен­ной льняной ветошью и хранят в спирте или в смеси спирта с эфиром в банках с притертыми пробками. Для работы стекла з'аранее извлекают пинцетом, вытирают досуха и по­мещают в банки. Стекла держат пальцами за края. Капля,

16

2 Заказ ш 7

17

нанесенная на хорошо подготовленное стекло, равномерно растекается и не принимает шаровидной формы.

Для приготовления мазка материал берут бактериологи­ческой петлей из платиновой или нихромовой (хромо-никель) проволоки длиной 5—6 см. Проволоку укрепляют в специ­альном держателе или впаивают в стеклянную палочку.

Рис. 8. Инструменты для приготовле­ния препаратов.

/ — бактериологическая петля; 2 — бакте­риологическая игла: 3 — шпатель стек­лянный.

Конец проволоки сгиба­ют в виде плотно замкну­той слегка вытянутой петли (рис. 8, /), разме­ры которой должны быть 1X1,5 мм или 2x3 мм. Петлю держат, как пис­чее перо, и в вертикаль­ном положении стерилизу­ют (освобождают от мик­робов) в средней части (ближе к периферии) пла­мени горелки. Петля бы­стро накаляется на всем протяжении, затем приле­гающую к ней часть дер­жателя несколько раз про­водят через пламя и толь­ко после этого петлю можно использовать для работы.

П риготовление и окраска препарата из культуры бакте­рий. Предметные стекла перед приготовлением мазков сте­рилизуют в пламени горелки.

Если мазок готовят из культуры, выращенной на плотной среде, то на охлажденное стекло стерильной петлей наносят каплю изотонического раствора или воды. Пробирку с куль­турой берут большим и указательным пальцами левой руки. Петлю стерилизуют в пламени горелки. Ватную пробку за­жимают мизинцем правой руки, извлекают ее из пробирки и оставляют в таком положении. Края пробки стерилизуют, обжигая их в пламени горелки, затем в пробирку через пламя вводят петлю. Остудив петлю о внутреннюю стенку пробирки, ею прикасаются к питательной среде на границе стекла (если петля недостаточно охлаждена, то она вызы­вает треск и расплавляет среду). Охлажденной петлей прц*

18

касаются к культуре бактерий на йоверхйос!й среды. ПетлЮ извлекают, быстро обжигают края пробирки, закрывают ее пробкой, проведенной через пламя, и ставят пробирку в штатив (все описанные операции проводят только в зоне пламени горелки). Петлю с культурой вносят в каплю воды на ^стекле, которую берут из пробирки также стерильной петлей. Материал распределяют равномерно круговыми дви­жениями на площади диаметром 1 —1,5 см, затем петлю стерилизуют.

Рис. 9. Приготовление мазков из мокроты больного туберку­лезом.

При изготовлении мазка из культуры в жидкой питатель­ной среде на середину стерильного предметного стекла на­носят каплю культуры петлей или пастеровской пипеткой, (затем пипетку погружают в дезинфицирующий раствор), каплю равномерно распределяют петлей. Препарат с об­ратной стороны стекла очерчивают восковым карандашом, так как очень тонкие мазки почти незаметны. С левой сто­роны препарата отмечают номер анализа или номер куль­туры. Хорошо приготовленный мазок с равномерно распре­деленными бактериями имеет правильно округлую или овальную форму и быстро высыхает.

Для приготовления мазков из гноя, мокроты пользуются двумя предметными стеклами. Небольшое количество ма­териала переносят стерильной петлей или иглой на середину предметного стекла и покрывают вторым так, чтобы оста­лись свободными треть первого и второго стекол. Стекла раздвигают в стороны (рис. 9) и получают два больших маз­ка одинаковой величины.

Мазки из крови готовят следующим образом. Стерильной иглой делают укол безымянного пальца левой руки. Прика­саются к выступившей капле крови (вблизи правого края) поверхностью хорошо обезжиренного стерильного предмет­ного стекла. Стекло быстро кладут на стол. Придерживая

19

его левой рукой, краем второго, несколько более узкою, шлифованного стекла прикасаются к капле крови, распола­гая стекло под углом в 45° (рис. 10). Легким быстрым дви­жением, прижимая шлифованное стекло, продвигают pro влево, не доходя 1—1,5 см до края. Хорошо сделанный /ма­зок имеет желтоватый цвет и просвечивает.

Препараты-отпечатки делают из внутренних органовтру-пов, пищевых продуктов плотной консистенции (мясо, /кол-

Рис. 10. Техника приготовления мазка крови. Стрелка показывает направление движения верхнего стекла.

баса, ветчина и др.). Для этого прижигают поверхность органа или пищевого продукта раскаленным скальпелем и из этого участка вырезают кусочек материала. Поверхно­стью разреза прикасаются к стеклу в 2—3 местах.

Высушивание и фиксирование мазка. Тонко приготовленные мазки обычно быстро высыхают на воздухе при комнатной температуре, более толстые высушивают в термостате или при подогревании над пламенем горелки или спиртовки. При этом стекло держат за края большим и ука­зательным пальцами, мазком вверх, средний палец поме­щают под стеклом, что позволяет регулировать степень на­гревания, чтобы недопустить свертывания белка бактерий и нарушения структуры клеток.

После полного высыхания мазок фиксируют с целью: 1) закрепить его на стекле, чтобы он не был смыт в процес­се окраски, и 2) убить микроорганизмы, которые лучше, чем живые, воспринимают красители и не представляют опасности для работающих.

Фиксация мазка в пламени горелки является самым рас­пространенным методом. Предметное стекло берут за край пинцетом или большим и указательным пальцами правой руки мазком вверх и троекратно проводят через наиболее горячую часть пламени, описывая круг диаметром около 15 см. Фиксация этим способом продолжается около 5— 6 секунд, а действие пламени — 2 секунды.

Мазки крови, препараты-отпечатки и в некоторых случаях мазки из микробов, которые деформируются при высокой

20

ют один краситель —фуксий или метйлемовый синий. Этот способ позволяет определить форму бактерий. Сложные ме­тоды окрасок используют с диагностической целью для изучения деталей строения бактерий.

Приготовление растворов красителей для простогоокрашивания. Фуксин основной (диамант-фуксин или солянокислый розанилин, или парарозанилин) используют для приготовления фенолового фуксина Циля, отличающегося большой стойкостью при хранении. Фукси­ном Циля окрашивают кислотоустойчивые микробы и спо­ры. Большинство обычных бактерий окрашивают одномо­ментно фуксином Пфейффера или метиленовым синим по Леффлеру.