1. Определите общее число трансформированных клеток

Предполагается ,что каждая колония на чашке произошла из отдельной клетки. По мере того, как клетки делятся, их становится все больше и больше, и она образуют колонию. Самый прямой способ подсчитать общее количество клеток, которые получили плазмиду и выжили - это подсчитать число колоний на чашке.

Общее число клеток=_______

В ведите число здесь

2. Определите количество плазмидной днк, добавленной в клетки, нанесенные на чашку lb/amp/ara

Чтобы определить количество ДНК в расчете на одну чашку, нам надо знать две вещи: какое количество ДНК исходно было взято в эксперимент, и какая доля всей ДНК попала на одну чашку.

Когда вы определите эти числа, вы умножите общее количество ДНК на долю ДНК, приходящуюся на одну чашку и получите количество ДНК в расчете на одну чашку LB/amp/ara

А. Определение количества ДНК

Общее количество ДНК, которое мы использовали, равняется произведению концентрации ДНК и взятого объема, т.е:

ДНК (мкг) = (концентрация ДНК, мкг/мкл) x (объем в мкл)

В этой работе вы использовали 10 мкл раствора плазмиды с концентрацией 0.08 мкг/мкл. Это означает, что в каждом микролитре раствора содержалось 0.08 мкг ДНК. Рассчитайте общее количество ДНК, которое было использовано в эксперименте

Общее количество ДНК (мкг) =______

В ведите число здесь

Как вы используете это число?

Б. Определение доли плазмидной ДНК, которая была нанесена на чашку

Теперь вам надо понять, какую часть от всей ДНК вы нанесли на одну чашку. Чтобы это узнать, разделите объем, нанесенный вами на чашку, на весь объем, содержавшийся в пробирке:

Объем, растертый по чашке LB/amp/ara

Весь объем пробирки

Доля ДНК=

На одну чашку вы взяли 100 мкл суспензии из пробирки, содержавшей 510 мкл жидкости. Почему 510? Если вы не помните, посмотрите внимательно экспериментальный протокол и отметьте все шаги, на которых вы добавляли жидкость в пробирку. Рассчитайте долю ДНК, приходящуюся на одну чашку.

Доля ДНК на чашку = ________

В ведите число здесь

Как вы используете эту информацию?

Итак, сколько микрограмм ДНК вы нанесли на одну чашку LB/amp/ara?

Чтобы ответить на этот вопрос, нужно умножить общее количество ДНК, использованное в эксперименте, на долю ДНК, приходящуюся на одну чашку.

Количество ДНК pGLO в расчете на одну чашку=Общее количество ДНК (мкг) x доля ДНК на одну чашку

Количество ДНК pGLO нанесенное на одну чашку= ________

В ведите число здесь

О чем это число говорит вам?

Посмотрите на ваши расчеты. Определите, какие числа вам необходимы, чтобы заполнить следующую таблицу:

Число колоний на чашке LB/amp/ara
Количество микрограмм ДНК нанесенное на чашку

Теперь используйте эти данные ,чтобы рассчитать эффективность трансформации.

Общее число клеток на чашке

Количество ДНК нанесенное на чашку (мкг)

Эффективность трансформации=

Эффективность трансформации

_________трансформантов/мкг

В ведите число здесь

Результаты расчетов эффективности трансформации выражаются очень большими числами. Ученые обычно используют укороченный способ записи таких чисел, называемый стандартным или научным способом. Например, если рассчитанная эффективность трансформации составляет 1000 трансформантов на микрограмм, они записывают это как:

10³ трансформантов/мкг (10³ это тоже самое, что 10x10х10 или 1000)

Как записать в научном виде 10 000 трансформантов на микрограмм?

Теперь предположим, ученые нашли, что эффективность трансформации составляет 5,000 трансформантов на мкг. Это будет записываться так: