Получение спермы

Обычно используемый на заводах метод сцеживания спермы в чашки часто приводит к потере части спермы и попаданию в сперму воды или слизи, поэтому ниже приводится более рациональная процедура отбора спермы.

Для отбора спермы потребуется ветошь, стандартный набор мужских уретральных катетеров разных размеров из ПХВ или красной резины и пластиковые одноразовые шприцы Жане, количество которых должно соответствовать количеству самцов, обычно единовременно используемых при воспроизводстве. Стандартный набор включает 10 катетеров пяти различных размеров, что позволяет подбирать катетер, плотно входящий в половое отверстие, не повреждая его. Катетер надевается на шприц Жане. Катетер и шприц должны быть сухими и чистыми. Самца фиксируют на боку, брюхом к самому краю столика, накрытого сухой ветошью, одновременно зажимая половое отверстие, чтобы избежать потерь спермы. Половое отверстие и область вокруг него насухо вытирается ветошью.

После выполнения указанных процедур свободный конец катетера вводится в половое отверстие так, чтобы конец вошел в один из семяпроводов на 1-3 см, шприц опускается чуть ниже края стола, так чтобы наклонно расположенный катетер от полового отверстия к шприцу не имел петель и изгибов. Очень медленно отводят поршень шприца, набирая сперму, наблюдая, чтобы катетер не присасывался к стенкам семяпровода, т.к. это может их повредить и привести к попаданию крови в сперму.

После отбора необходимого количества спермы катетер аккуратно вынимают из полового отверстия и снимают со шприца со спермой, который убирают в прохладное темное место. Сперма в шприце Жане не требует переливания в другие емкости, попадание мусора и воды исключено, кроме того, из шприца можно всегда отмерить необходимое количество спермы без применения дополнительной мерной тары. Особенно важно предостеречь от принятой на заводах практики хранения спермы от нескольких самцов в одной емкости. В случае попадания в емкость различной спермы оплодотворяющая способность такой смеси резко падает и может быть полностью утрачена за 20-30 мин. Смешивание спермы может быть осуществлено только непосредственно перед оплодотворением.

Следует отметить, что оплодотворение одной самки несколькими самцами в «одном тазу» не обеспечивает должного уровня генетической разнокачественности получаемого потомства, формирование которой особенно важно в условиях ограниченного числа производителей и низкой эффективной численности искусственно формируемой популяции. Причина этого разнокачественность спермы, получаемой от разных самцов. Сперма различных самцов имеет разную активность и концентрацию, в значительной мере зависящие от физиологического состояния самцов, условий преднерестового выдерживания и получения спермы, кратности и времени отбора эякулята. В случае оплодотворения икры от одной самки спермой разного качества велика вероятность преобладания в потомстве особей от одного самца, что неприемлемо при формировании гетерогенного стада или популяции.

Работы, проведенные в Южном филиале ФСГЦР показали, что для получения генетического разнокачественного потомства осетровых рыб, икру, полученную от одной самки, целесообразно разделять на 3-5 порций, оплодотворяя каждую порцию спермой одного самца, а после оплодотворения ее можно снова соединять, обесклеивая и инкубируя вместе.

При проведении воспроизводственных работ на предприятиях, ориентированных на выпуск молоди в естественные водоемы нецелесообразно использовать одних и тех же самцов для оплодотворения разных самок, тем более что численность зрелых самцов, заготавливаемых в море пока еще достаточно велика. При резком сокращении численности «диких» самок, используемых заводами, увеличение количества самцов, используемых при скрещивании, позволяет повысить эффективную численность искусственно формируемых популяций.

После получения спермы необходимо оценить ее качество. В настоящее время используется ряд критериев оценки качества спермы сельскохозяйственных животных, из которых, ввиду технологических особенностей, для осетровых рыб применяют только один – подвижность сперматозоидов по бальной системе (Персов, 1975), оценивающей долю неподвижных и совершающих колебательные движения сперматозоидов, и долю сперматозоидов, совершающих поступательные движения, после добавления в сперму воды. Такой критерий, как концентрация спермы, оценивается «на глаз» и практически не учитывается. Применение показателей скорости движения сперматозоидов и продолжительности их активности вообще не принимаются во внимание.

Важными особенностями икры осетровых рыб, с учетом которых основана оптимальная технология оплодотворения, являются:

1. способность к полиспермному оплодотворению;

2. скорость активации икры после попадания в воду;

3. время потери икрой способности к оплодотворению после попадания в воду;

4. время приобретения икрой клейкости.

Возможность полиспермного оплодотворения обусловлена наличием у икры осетровых рыб нескольких или многих микропиле. Именно эта особенность и определяет применение «полусухого» (или «русского») способа оплодотворения.

Основной принцип данного способа заключается в том, что в икру добавляют уже раствор спермы в воде, концентрация которого обеспечивает наибольшую вероятность моноспермного оплодотворения. Для достижения необходимой концентрации оптимальное соотношение спермы и воды составляет 1:200. Этот же прием позволяет избежать продолжительного пребывания икры в воде без спермы (как при «мокром» способе), т.к. икра сразу попадает в раствор спермы в воде, где очень быстро оплодотворяется.

В процессе оплодотворения очень важно, чтобы соотношение икры и оплодотворяющего раствора было оптимальным. Учитывая, что избыток оплодотворяющего раствора при оплодотворении «полусухим» способом не может иметь негативных последствий (важна только концентрация спермы в воде) необходимо обеспечить соотношение икры и раствора, при котором всю смесь было бы легко перемешивать, и обеспечивался контакт всех икринок с оплодотворяющим раствором. Минимальное отношение спермы и икры составляет 10 мл/кг или 2 л оплодотворяющего раствора на 1 кг икры. В норме данного соотношения и необходимо придерживаться. Вместе с тем, при наличии густой, трудноотделимой овариальной жидкости, крови или частичной резорбции следует увеличить количество оплодотворяющей жидкости в 1,5-2,0 раза.

Вопрос о продолжительности технологической процедуры оплодотворения, т.е. времени пребывания икры в оплодотворяющем растворе, должен быть рассмотрен отдельно.

Технологически продолжительность пребывания икры в оплодотворяющем растворе по действующим рекомендациям определяется по следующим параметрам:

1. продолжительность оплодотворяющей способности спермы;

2. время, на протяжении которого икра способна к оплодотворению;

3. время до приобретения икрой клейкости.

Действующие рекомендации определяют время оплодотворения для разных видов осетровых рыб от 3 до 5 минут, обеспечивая максимальную реализацию оплодотворяющего потенциала спермы, вместе с тем практически вся полноценная икра способная к оплодотворению оплодотворяется в течение первых 20-60 секунд. При этом, у части рыб, особенно стерляди, икра приобретает клейкость еще до завершения процедуры оплодотворения, что затрудняет работу. Во многих странах с развитым осетроводством икру осетровых рыб не оплодотворяют дольше 1 минуты. Учитывая трудоемкость процесса оплодотворения и необходимость очень быстро проделывать все манипуляции после 3-5 мин оплодотворения из-за появления клейкости, можно считать теоретически оправданным и целесообразным проведение ряда сравнительных экспериментов для уменьшения времени оплодотворения до 1 мин.