45.Реакції лізису. Реакція зв’язування комплементу,її практичне використання.

Для реакції лізису необхідні антиген,антитіло і комплемент.Антигеном може бути мікроорганізми,еритроцити або інші клітини.Як антитіло використовують специфічну сироватку або сироватку хворого.Залежно від того,проти яких клітин спрямована дія лізинів,вони мають свої назви: проти бактерій-бактеріолізини,спірохет-спірохетолізини,еритроцитів-гемолізини,проти ін.клітин-цитолізини.Комплемент при утворенні комплексу клітина-антитіло,зв’язується з ним,активується за класичним шляхом і викликає розчинення клітин.Без комплементу лізис клітин неможливий.

Р-я імунного гемолізу(РГ).Антигеном є еритроцити,переважно еритроцити барана.Другим компонентом є гемолітична сироватка,її одержують з крові кролів,імунізованих еритроцитами барана.Гемоліз настає тільки в присутності комплементу.Ця р-я використовується для визначення кількості комплементу або як індикаторна в реакції зв’язування комплементу.За допомогою РГ підготовляють компоненти для цієї реакції-визначають титр гемолітичної сироватки-найвище розведення ,яке ще дає РГ і встановлюють робочу дозу комплементу-кількість його,яка забезпечує повний гемоліз еритроцитів.

Р-я зв’язування комплементу.Ця р-я широко використовується з метою серологічної діагностикт інфекційних хвороб.Досліджувана сироватка прогрівається при 56 для інактивації власного комплементу.У пробірку вносять цю сироватку,відповідний антиген і комплемент у робочій дозі.Р-я відбувається в термостаті.Якщо в досліджуваній сироватці є антитіла,вони зв’язуються з антигеном і фіксують комплемент.У другій фазі виявляють результат реакції за допомогою індикаторної гемолітичної системи.Якщо ж у результаті реакції наступив гемоліз-р-я негативна,антитіл у досліджуваній сироватці немає.

РЗК використовують у діагностиці сифілісу,висипного тифу,Ку-гарячки та інших рикетсіозів,а токож багатьох вірусних захворювань.

46.Реакції з міченими антитілами або антигенами.Принципи використання реакцій імунофлуоресценції(ріф),імуноферментного радіоімунного аналізу.

Реакція імунофлуоресценції(РІФ).Чутливість імунологічних реакцій значно зростає завдяки використанню мічених реагентів,наприклад,антитіл ,конюгованих з флуорохромом.При зв’язуванні таких імуноглобулінів з антигеном у люмінесцентному мікроскопі спостерігають світіння об’єктів (бактерій,вірусів,клітин)покритих міченими

Антитілами.Імунофлуоресцентним методом можна також визначати антитіла в сироватці хворого,на поверхні клітин і тканин.У цьому випадку використовують мічені флуоресцеїном сироватки проти глобулів людини(антиглобулінові),яким обробляють комплекс антиген-антитіло.Внаслідок цього він під дією ультрафіолетових променів починає світитись зеленим світлом.У першому випадку говорять про прямий,у другому-про непрямий імунофлуоресцентний метод.

Імуноферментний метод(ІФА).Імуноферментний метод використовують для виявлення як антитіл,так і антигенів.У лунки полістиролових планшеток вносять антигени,які в них адсорбуються на твердій основі.Потім додають досліджувану сироватку.Якщо в ній є антитіла,вони сполучаються з адсорбованим антигеном .Незвязані антитіла відмивають і додають антиглобулінову сироватку ,зв’язану з ферментом(пероксидаза хрону,галактозидаза).Вона з’єднується з антитілами,які знаходяться в комплексі з антигеном.Після чергового відмивання реагентів в лунки вносять субстрат ,який розкладається ензимом,що призводить до появи певного забарвлення.Інтенсивність його пропорційна кількості антитіл у досліджуваній сироватці.

Радіоімунний метод(РІМ) за своїм механізмом відрізняється від попереднього тим,що замість фермента для антиглобулінової сироватки використовують радіоактивні ізотопи.Кількість антитіл визначають за інтенсивністю радіоактивного випромінення ,що реєструється спеціальними лічильниками.

Імуноферментний і радіо імунний методи займають чільне місце в діагностиці багатьох захворювань людини і в наукових дослідженнях.За їх допомогою,наприклад,діагностують вірусні гепатити,СНІД,виявляють ракові антигени ,вивчають антигенну структуру м/о