9.Виготовлення бактеріологічних препаратів. Барвники та допоміжні реактиви. Прості та складні методи фарбування.

Виготовлення препаратів-мазків з культури, що виросла на твердому середовищі. На знезаражене предметне скельце бактеріологічною петлею наносять краплю 0,9% розчину хлориду натрію (фізрозчину). Після повторної стерилізації петлі, із пробірки зі скошеним агаром набирають невелику кількість культури, яку наносять біля ізотонічного розчину хлориду натрію, і поступово розтираючи його по склу та емульгуючи в краплі, готують тонкий, рівномірний мазок округлої чи овальної форми. Виготовлення препаратів-мазків з культури, яка виросла на рідкому середовищі. Бактеріологічною петлею набирають краоплю рідкого живильного середовища, в якому ростуть мікроорганізми, із додержанням правил стерильності. Торкаються петлею центра предметного скла і роблять рівномірний тонкий мазок. Якщо для забору матеріалу використовують пастерівську піпетку, то її також тримають у правій руці та прожарюють у полум’ї перед внесенням у пробірку. Після попадання в піпетку рідкого середовища з мікробами, верхній кінець її закривають вказівним пальцем правої руки, виймають з пробірки, проносять її відкритий кінець над полум’ям пальника. На поверхню скельця випускають краплю середовища. Стерильною бактеріологічною петлею роблять мазок. Виготовлення препаратів для дослідження мікроорганізмів у живому середовищі. Для цього викор. методи *висячої* та *роздавленої* краплі. Препарат для *висячої* краплі готують на покривному скельці, на яке наносять краплю бульйонної культури мікроорганізмів. Якщо вик. культура яка виросла на агарі, спочатку на скельце наносять стерильну краплю фізрозчину, потім у нього стерильною петлею вносять культуру мікробів. Спеціальне предметне скельце з лункою, края якої попередньо змащені вазеліном, притуляють до покривного скельця з краплею так, щоб вона знаходилась у центрі лунки, і перевертають препарат покривним скельцем догори. Якщо препарат виготовлено правильно, то крапля вільно звисає у лунку, не торкаючись її поверхні. Препарат *роздавленої* краплі відрізняється тим, що краплю готують на звичайному знежиреному предметному склі, а потім покривають її покривним скельцем, стежачи за відсутністю бульбашок повітря. Мазок перед забарвленням висушують на повітрі або над полум*ям пальника і фіксують після повного висихання. Фіксаці. проводять у полум*ї пальника, тричі вносячи скельце через полум*я. Зафіксований препарат кладуть на спеціальну підставку над лотком, наносять барвник. Після забарвлення препарат промивають водою, висушують і мікроскопують. Найчастіше використовують основні барвники : фуксин основний, нейтральний червоний, конго червоний, метиленовий та толуїдиновий синій, генціатвіолет, метиленовий фіолетовий, хризоїдин, везувін, брильянтовий зелений, малахітовий зелений. При простих методах фарбування вик один барвник,при складних – два і більше. Складні методи фарбування: Метод Грама вик. для виявлення тинкторіальних властивостей, поділ м/о на грам позитивні і грамнегативні ( генціанвіолет 1-2 хв, р-н Люголя 1хв, спирт, вода, р-н фуксину 1-2 хв, вода, висушування та мікроскопія). Грам позитивні – темно фіолетові, грам негативні- червоні. Метод Ціля-Нільсена поділ на кислотостійкі і нестійкі (фуксин, вода, в сірчану кислоту 2-3 рази, вода, 3-5 хв метиленовий синій, вода, висушування і мікроскопування). Кислотостійкі – червоні, нестійкі – голубі. Метод Буррі-Гінса (виявлення капсул) – фіксують, промивають водою, забарвлюють фуксином або тіоніном, промивають водою, висушують, мікроскопують. На темному фоні забарвлені в червоний або синій колір мікроорганізми, оточені світлим ободком – капсулою. Метод Ожешка (спори) – 0,5% хлористоводневої кислоти, підігрівають 1-2 хв, промивають водою, фіксують, забарвлюють за методом Цілля. Спори червоного кольору, а тіла клітин – голубого. Метод Нейссера (включення) – 1-2 хв оцтовокислий метиленовий синій, р-н Люголя на 10-30 с., вода, хризоїдин 1хв, вода, висушують.Тіла бактер клітин – блідо жовті, зерна волютину – темносиній.