3. Физико-химические свойства белков. Ионизация белков в

растворе, полиэлектролитные свойства. Электрофорез белков

Физико-химические свойства белков: 1)белки амфотерны; 2)способны к буферному взаимодействию; 3)имеют заряд на молекуле белка; 4)явление светорассеяния – используется при количественном определение белков; 5)гидрофильность белка – формирование онкатического давления; 6)белки не способны к диффузии. Молекулярная масса белков: определение молекулярной массы проводится физико-химическими методами, к которым относят: а)седиментационныйанализ; б)дихромотографию; в)электрофорез. Современные методы диэлектрофореза позволяют достаточно точно и бычтро определить молекулярную массу белка по скорости его миграции. В тех случаях, когда известен молекулярный состав белка, его молекулярную массу определяют исходя из молекулярного веса конкретных аминокислот.

Ионизация ионогенных групп в результате ионной адсорбции приводит к тому, что в растворе белковые глобулы ведут себя как макроионы, знак и величина заряда которых зависят от рН и состава растворителя. Величину рН, отвечающую равенству общего числа положительных зарядов общему числу отрицательных, т. е. суммарному или эффективному заряду глобулы, равному нулю, называют изоэлектрической точкой (ИЭТ) белка. Изо-электрическая точка основная электрохимическая константа белков. Белки в этой точке электронейтральны, а их набухае-мость и растворимость наименьшие. Снижение растворимостибелков при достижении электронейтральности их молекул широко используется для выделения их из растворов, например при получении белковых изолятов.

Электрофорез белков

Метод основан на том, что при определённом значении рН и ионной силы раствора белки двигаются в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, двигаются к аноду (+), а положительно заряженные белки - к катоду (-).

Электрофорез проводят на различных носителях: бумаге, крахмальном геле, полиакриламидном геле и др. В отличие от электрофореза на бумаге, где скорость движения белков пропорциональна только их суммарному заряду, в полиакриламидном геле скорость движения белков пропорциональна их молекулярным массам.

Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле выше, чем на бумаге. Так,

при электрофорезе белков сыворотки крови человека на бумаге обнаруживают только 5 главных фракций: альбумины, α₁ глобулины, α₂-глобулины, β-глобулины и γ-глобулины (рис. 1-57). Электрофорез тех же белков в полиакриламидном геле позволяет получить до 18 различных фракций. Для обнаружения белковых фракций полоски бумаги или столбики геля обрабатывают красителем (чаще всего бромфеноловым синим или амидовым чёрным). Окрашенный комплекс белков с красителем выявляет расположение различных фракций на носителе.

Методы исследования белкового состава крови: 1. Электрофорез на бумаге – выделено 5 фракций белков, электрофорез в агаровом геле – выделено 8 фракций, в полиакриламиновом геле – 17 фракций.