Вскрытие животных

Вскрытие погибших, а иногда и заболевших животных прово­дится для извлечения пораженных органов, обнаружения возбу­дителя, вызвавшего гибель животного, выделения чистой культу­ры возбудителя и определения места его локализации. Заболевших. животных забивают с помощью эфирного наркоза или воздушной эмболии.

При вскрытии трупа животного необходимо соблюдать ряд ус­ловий. Вскрытие следует производить как можно скорее после ги­бели животного, так как кишечная микрофлора быстро проника­ет в ткани, кровь и органы. При комнатной температуре это про­исходит через 10—18 ч, а при температуре холодильника — через 20—22 ч, поэтому труп до вскрытия сохраняют на холоде.

Животных вскрывают с соблюдением правил асептики, исполь­зуя только стерильные инструменты, которые меняют при вскры­тии каждой полости, а также органа.

Перед вскрытием шерсть животного смачивают дезинфи­цирующим раствором для пре­дотвращения заражения работа­ющих и инфицирования окру­жающих предметов. Трупы жи­вотных, павших от чумы, погру­жают в керосин для инактивирования эктопаразитов — пере­носчиков возбудителей чумы. Трупы вскрывают на хорошо выстроганной окрашенной до­ске, помещенной в металличе­скую кювету с дезинфицирую­щим раствором.

Результаты вскрытия четко и подробно отражают в протоко­ле, указав дату заражения и ха­рактер введенного материала.

Труп животного кладут на спину, растягивают в стороны лапы, осматривают наружные покровы, отмечая наличие язв (при туберкулезе), выпадение шерсти и изменение цвета кожи (при анаэробной инфекции) и т. п. Затем труп животного фиксируют к доске препаровальными иглами или острыми гвоздями (рис. 5).

Рис.5.Фиксация и вскрытие трупа белой мыши

Перед вскрытием инструменты переносят из стерилизатора в банку со спиртом, а перед применением их обжигают в пламени горелки.

Вскрытие наружных покровов начинают с продольного разре­за кожи от нижней челюсти до лобка. Кожу отсепаровывают, де­лают надрезы по направлению к конечностям и отбрасывают ее лоскуты в стороны, обнажая всю переднюю поверхность тулови­ща животного. Отмечают состояние подкожной клетчатки и лим- фатических узлов и при наличии в них изменений делают посевы в питательные среды и препараты-отпечатки (прикасаясь пред­метным стеклом к месту разреза). Использованные инструменты погружают в дезинфицирующий раствор.

При вскрытии грудной полости всю область, освобожденную [ от кожи, смачивают спиртом и поджигают. Пинцетом захватыва­ют мечевидный отросток, делают поперечный разрез под ним и два продольных, перерезая ребра в местах их соединения с хря­щами. Полученный лоскут в виде треугольника (основание у ди­афрагмы, а вершина у ключицы) откидывают вверх и изучают состояние органов грудной клетки, отмечают наличие экссудата, делают посев крови и препараты-отпечатки из ткани легких. Кровь из сердца берут пастеровской пипеткой. Предварительно разреза­ют эпикард и прижигают поверхность мышцы сердца, приклады­вая к ней раскаленный скальпель или пинцет, затем капилляр пипетки вводят в область желудочка или предсердия животного; кровь, поступившую в капилляр, сеют на питательные среды, а из остатка ее делают мазки. Вскрытие брюшной полости производят осторожно, чтобы не захватить петлю кишки. Для этого приподнимают пинцетом брюш­ную стенку, делают ножницами продольные разрезы от диафраг­мы до лобка и два поперечных разреза по направлению к конеч­ностям. Отвернув мышечные лоскуты, исследуют состояние орга­нов брюшной полости, обращая особое внимание на величину, цвет и консистенцию селезенки, печени, надпочечников.

Затем делают посевы из ткани селезенки, печени, брыжеечных лимфатических узлов и экссудата. Поверхность органа прижигают раскаленным скальпелем и в этом участке производят разрез. В ме­сте разреза петлей делают соскоб и сеют в питательные среды. Для приготовления мазка вырезают небольшой кусочек ткани, берут его пинцетом и прикасаются к поверхности предметного стекла (препарат-отпечаток) или распределяют по нему тонким слоем. Мазки-отпечатки на предметных стеклах фиксируют в смеси Ни­кифорова 10-15 мин, окрашивают и изучают. Посевы помещают в термостат.

После вскрытия труп животного сжигают, автоклавируют, или ки­пятят в течение 1 — 2 ч в растворе фенола, а при невозможности это сделать заливают на сутки 5% лизолом или 5% карболовой кислотой. Все инструменты, кю­вету обрабатывают дезинфицирующими ра­створами или стерилизуют кипячением в течение 40 мин, а доску для вскрытия заливают дезинфицирующим раствором..

Трупы животных, павших от особо опасных инфекций, вскры­вают в специальных помещениях с соблюдением особых мер пре­досторожности.

Выделение чистой культуры аэробных и анаэробных микроор­ганизмов и их идентификацию проводят по общепринятым пра­вилам.

Определение вирулентности микроорганизмов

При изучении свойств микроорганизмов в ряде случаев опре­деляют их вирулентность (степень патогенности). Это необходимо для характеристики возбудителей инфекций, выделенных от боль­ных, микробоносителей и из внешней среды, установления оста­точной вирулентности живых вакцин, выявления напряженности иммунитета у животных и т.д.

Вирулентность выражают количественно: в величине леталь­ной или инфицирующей дозы, индексах адгезии, инвазии, цито-токсичности и других показателях степени болезнетворности изу­чаемого штамма. Например, Dlim (dosis letalis minima, минимальная летальная доза) — минимальное количество микроорганизмов, вызывающее гибель 95 % животных определенного вида в группе.

LD₅₀ (половинная летальная доза) — количество микроорганиз­мов, вызывающее гибель 50 % зараженных животных в группе. LD₅₀ является более достоверным показателем вирулентности, так как в меньшей степени зависит от индивидуальной чувствительности животных.

При определении LD₅₀ вид, пол, вес животных, условия со­держания, кормления должны быть строго стандартизованными. Из культуры бактерий, вирусов или токсина делают 10-кратные разведения, каждое из которых вводят не менее чем 4—6 живот­ным. Через определенный срок отмечают количество погибших животных в каждой группе и вычисляют LD₅₀. Для вычисления LD₅₀ существует несколько методов: Рида и Менча, Блисса (метод пробитов), Кербера в модификации И. П. Ашмарина и др. С этими методами можно познакомиться в специальных руководствах по биометрии.

В настоящее время для определения вирулентности стараются не использовать лабораторных животных (в связи с высокой сто­имостью исследования и по этическим соображениям). С этой це­лью широко применяются другие методы определения вирулент­ности: заражение культур тканей, куриных эмбрионов, культур простейших, а также выявление отдельных факторов патогенности или их генетических детерминант.

Многие патогенные свойства микроорганизмов коррелируют с легко выявляемыми in vitro фенотипическими признаками, полу­чившими название маркеры вирулентности. В ряде случаев для оп­ределения вирулентности достаточно обнаружить такие признаки у выделенной культуры. Так, у энтеропатогенных иерсиний (воз­будителей иерсиниоза и псевдотуберкулеза) определяют кальций-зависимость роста при 37 °С (на кальцийдефицитной среде), у воз­будителей кишечных и мочевых эшерихиозов — соответствующие адгезины (в реакции агглютинации), у дифтерийной палочки — экзотоксин (в реакции иммунодиффузии) и т.д.

Задание:

1. Демонстрация заражения и вскрытия трупа экспериментального животного

2. Записать в лабораторной тетради правила заражения и вскрытия лабораторных животных

СКР

1. Какова цель биологических исследований в микробиологии и иммунологии?

2. Какие виды животных чаще всего используются в экспериментах?

3. Какие способы заражения лабораторных животных используют?

4. Как определить LD₅₀?