Робота №10 методи висіву мікроорганізмів на живильні середовища.

Мікроорганізми можна вирощувати на середовищах різних типів (тверді, напіврідкі, рідкі) в чашках Петрі, пробірках, колбах, флаконах. В залежності від кількості видів мікробів, які містяться в патологічному або клінічному матеріалі, в процесі вирощування отримують або чисту або накопичувальну мікробну культуру. Характер росту на вищезазначених типах середовищ також відрізняється (окремі колонії, плівка, ріст по “штриху”).

На поверхні рідких поживних середовищ вирощують культури аеробних або факультативно-анаеробних мікроорганізмів. Представники таких видів утворюють на поверхні плівку. Колби або пробірки засівають відповідною кількістю мікробного матеріалу (підготованою суспензією), користуючись стерильною піпеткою чи петлею. Мікробні культури, вирощені на рідкому середовищі, мають назву бульйонних культур.

В напіврідких середовищах мікроби найчастіше вирощують за допомогою висіву уколом ( мікробіологічна голка). На твердих поживних середовищах, користуючись відповідною методикою, можна отримати культури мікроорганізмів у вигляді колонії (поверхневі або глибинні висіви), плівки чи штриха (поверхневі висіви) . Будь-яка мікробна культура, вирощена на твердому середовищі, називається агаровою культурою.

Після висіву мікроорганізмів пробірки і чашки Петрі поміщають в термостати, де створено оптимальні умови для росту культури. Колби із засіяними рідкими середовищами вирощують в термостатованих приміщеннях на шуттель-апаратах (взбовтування середовища забезпечує постійне надходження поживних речовин до мікробних клітин в плівці).

Поверхневий метод висіву

На поверхню агарових поживних середовищ мікроби можуть потрапити за рахунок дії сил гравитації (пасивно) або в результаті відповідних дій дослідника (рис. 9)

Поверхневий висів
Осідання мікробних клітин	Примусове нанесення на поверхню середовища
Метод Коха	Метод штриха	Висів плівкою
Використовується для визначення кількості мікробів в 1м3 повітря (мікробне число повітря)	Використовуються для отримання чистих культур мікроорганізмів.

Рис 9. Призначення різних методів поверхневого висіву мікроорганізмів.

Методики поверхневих висівів

Поверхневий висів мікробів на тверді поживні середовища здійснюється за допомогою різноманітних методик (табл. 16).

Таблиця 16. Методики і результати поверхневих висівів.

Назва методу	Методика висіву	Результат висіву
1	2	3
Метод Коха	В стерильні чашки Петрі стерільно наливають 10-15 мл поживного середовища. Після загусання останнього, чашки відкривають на 5 хв в місці відбору зразка. За цей час на поверхню поживного середовища площею 100 см2 осідають всі мікробні клітини з 10 л повітря.	Чашки закривають і інкубують в термостаті. Через 2-3 доби на поверхні середовища утворюється змішана мікробна культура (різноманітні колонії).
Метод штриха	1. Зворотню сторону чашки Петрі розділяють на 3 сектори. Петлею з культурою роблять висів в секторі №1. Петлю стерилізують на вогні і охолоджують впродовж 15 с. Проводять петлею по поверхні середовища в секторі №1 і одразу роблять штрих в секторі №2. Така ж операція повторюється для сектору №3. 2. Штрихом можна засівати мікроорганізми і на поверхню твердого середовища в пробірках, яке має назву «скошений агар» (див. розділ «Методи виділення чистих	1. Чашки інкубують в термостаті вверх дном. В секторі №1 виростає велика кількість колоній, в секторах №2 та №3 – з’являються ізольовані колонії.
1	2	3
Висів плівкою	На поверхню поживного середовища в чашку Петрі №1 наливають незначну кількість бульйонної культури або суспензії мікробів у стерільній воді (0,5 мл). Розподіляють скляним шпателем. Шпатель одразу переносять в чашку №2, потім – в №3. Чашку №1 залишають на 10-20 хв для остаточного всмоктування рідини.	Чашки інкубують в термостаті. В чашці №1 мікроорганізми ростуть плівкою, в чашках №2 та №3 – з’являються ізольовані колонії.

Висів штрихом здійснюють на стадії виділення чистої культури, висів плівкою – при дослідженні окремих властивостей мікроорганізмів (див. “Перевірка антибіотикорезистентності мікробних культур”). Змішану культуру у вигляді окремих колоній отримують тільки при дослідженні складу мікробної асоціації повітря шляхом поверхневого висіву.