50. Культуральная диагностика дерматомикозов

Используется для уточнения диагноза и дифференциальной диагностики, изучения макроскопического строения гриба, выделения чистой культуры.

Для выращивания культуры гриба применяют чаще всего обычные среды Сабуро (жидкие или в виде агара): синтетические, реже — специальные. Наиболее часто пользуются твердой средой Сабуро: на 1000 мл дистиллированной воды берут 10 г пептона, 40 г технической глюкозы и 18—25 г агара. Количество агара зависит от его качества: чем оно выше, тем количество его меньше, и наоборот. Предварительно в течение суток в воде замачивают в стеклянной колбе измельченный агар. На следующий день к нему добавляют пептон и доводят до кипения. Затем смесь перемешивают и засыпают в нее глюкозу. Горячий раствор разливают через фильтр по 4—5 мл в стерильные пробирки или чашки Петри и ставят в автоклав на 15 мин при температуре 110°С, давлении 49,0332 кПа (0,5 атм). Извлеченные из автоклава пробирки ставят под углом («скашивают» агар) с целью увеличения поверхности для посева. Приготовленную среду охлаждают и хранят в темном месте при температуре 8—12 °С. Срок годности ее колеблется в среднем от 1 до 1,5 мес, зимой — максимально 2 мес.

Взятый для исследования материал перед посевом измельчают на стерильном предметном стекле или чашке Петри; посев желательно проводить в боксе над пламенем спиртовки, газовой горелки петлей или микологическим крючком, соблюдая все правила работы в бактериологической лаборатории. Жидкий материал сеют в виде точек или штрихов, твердые частицы — в виде точек. Инкубацию культуры проводят в обычном термостате при температуре 22—28 °С для нитчатых

грибов и 37°С~ для дрожжеподобных на протяжении 2—3 нед.

Реакция может быть и ложноположительной при введении молока, использовании в лечебных целях пирогенала.

Следовательно, положительная реакция Борде — Жангу не служит бесспорным доказательством наличия гонококковой инфекции, как и отрицательная не может быть свидетельством отсутствия гонореи. Однако положительные результаты ее в течение длительного времени должны нацелить врача на поиск очага гонококковой инфекции в организме.

В качестве антигена используют убитую гонококковую культуру, содержащую 3—4 млрд. микробных тел в 1 мл. Гонококковый антиген консервируют раствором формальдегида и разливают в ампулы по 1— 5 мл. Не вскрытые ампулы пригодны в течение 6 мес, вскрытые можно сохранять 2—3 дня в стерильной пробирке в холодильной камере при температуре 3—5 °С,

Реакцию связывания комплемента Борде — Жангу проводят аналогично реакции Вассермана (см. № 121). Гонококковый антиген разводят изотоническим раствором натрия хлорида соответственно указанному на этикетке ампулы титру. Реакцию проводят чаще всего в объеме 2,5 мл, поэтому к 0,5 мл разведенной 1 : 5 испытуемой сыворотки добавляют в каждую пробирку по 0,5 мл разведенного антигена. Остальные 1,5 мл составляют 1 мл гемолитической системы и 0,5 мл комплемента.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной в разной степени задержки гемолиза в испытуемой сыворотке. В контроле (сыворотка крови здоровых людей) наблюдается полный гемолиз.