Граф логической структуры темы « Методы диагностики наследственных болезней обмена. Занятие 2»

Методы биохимической диагностики нбо

Исследование образцов крови

Исследование образцов мочи

Полуколичественные методы (тонкослойная хроматография)

2.

1

Скрининг - тесты

.

Высокоэффек-тивный электрофорез

3.

Количественные методы

Глюкоза крови

Газы крови

Аммиак крови

Лактат крови

Высокоэффек-тивная жидкостная хроматография

Газожидкостная хроматография

Тандемная масс-спектро-метрия

Жидкостная хроматогра-фия высокого давления

Йонообменная хроматография

аминокислоты

органические кислоты

карнитин, ацилкарнитины

углеводы

липиды

нейротрасмиттеры

пурины, пиримидины и др.

Приложение.

Приложение №1

Аминокислоты

В промежуточном метаболизме аминокислоты (АК) играют важную роль не только как блоки для построения белков, но также как составная часть разных метаболических функций, таких, как реакции цитозольного метилирования и нейротрансмиттеров. Большое разнообразие генетических нарушений оказывает как прямое, так и косвенное влияние на метаболизм АК; эти нарушения можно распознавать с помощью анализа уровня АК в соответствующей биологической жидкости. В таблице (см. ниже) представлена интерпретация некоторых результатов исследования уровня свободных аминокислот крови.

Плазма

Количественный анализ содержимого АК в плазме (или сыворотке) с помощью йонообменной хроматографии или жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД) дает полную информацию об изменениях, которые происходят в гомеостазе аминокислот. Поэтому он является одним из основных исследований, проводимых у большинства пациентов с подозрением на наличие метаболического нарушения.

У пациентов с гиперамониемией или с подозрением на острую аминоацидопатию анализ должен выполняться неотложно. Количественное определение аминокислот можно осуществить с помощью тандемной масс-спектрометрии (MS-MS) в пятнах крови, высушенных на бумаге (Гатри-бланки) или с помощью бомбардировки быстрыми атомами /масс-спектрометрии (FAB-MS). Для некоторых нарушений, таких как фенилкетонурия и болезнь «кленового сиропа», этот тест является замечательной альтернативой классическим хроматографическим методам, так как он позволяет избежать венопункции у пациента.

Концентрация аминокислот в плазме колеблется в зависимости от метаболического статуса, тому забор стандартных проб следует делать через 4-6 часов после последнего приема пищи. Кроме того, наиболее ценно определение количественного содержания аминокислот в послеобеденных пробах (и в пробах, взятых натощак), в особенности при подозрении на нарушение энергетического метаболизма. Перед проведением анализов после приема пищи пациентам рекомендуется принимать определенную пищу с целью потребления определенных субстратов. Пробы после приема пищи показывают высокие уровни незаменимых аминокислот; чрезмерное повышение уровня аланина указывает на дефект метаболизма пирувата и может свидетельствовать о митохондриальном нарушении. Обычно голодание приводит к повышению уровня аминокислот с разветвленной боковой цепью; большинство же других аминокислот имеют низкие уровни.

Некоторые АК, а именно гомоцистеин и триптофан, требуют применения особых методов (ЖХВД) точного определения количественного содержания. Точное определение количественного содержания общего гомоцистеина является важнейшим моментом при оценке гипергомоцистеинемий.

Нормальные значения содержания общего гомоцистеина (натощак):

у детей до 10 лет составляют 3,5-9 мкмоль/л;

у детей старше 10 лет- 4,5-11 мкмоль/л;

у женщин предклимактерического возраста – 6-15 мкмоль/л;

у женщин постклимактерического возраста – 6-19 мкмоль/л;

у мужчин – 8-18 мкмоль/л.

Интерпретация результатов исследования уровня свободных аминокислот крови.

№	Амино кислота	Дополнительные изменения	Нарушение
1	 лейцин  изолейцин  валин		Болезнь кленового сиропа
			Диабет
		 уровня лактата	Недостаточность пируватдегидрогеназы
2	 лейцин  изолейцин  валин		Низкобелковая диета
			Гиперинсулинизм
3	 уровня тирозина	 уровня сукцинилацетона	Тирозинемия I типа
		Мягкое  уровня 4-гидроксифениллактата, 4-гидроксифенилпирувата, N-ацетилтирозина	Тирозинемия II типа
		Резкое  уровня 4-гидрокси-фениллактата, 4-гидроксифенилпирувата, N-ацетилтирозина	Тирозинемия III типа
		Возможное  уровня метионина	Дисфункция печени (недостаточность -1антитрипсина, галактоземия, фруктозурия, митохондропатии)
4	 фенилала-нина		ФКУ
			Нарушения синтеза тетрагидробиоптерина (м/б  PHE)
		 уровня тирозина	Дисфункция печени
5	 уровня лизина		Гиперлизинемия
			Вторичное, при  2-оксо-глутарата
6.	 уровня лизина	 глицина, аланина, серина, глутамина + орнитина, аргинина крови  ORN, ARG мочи;  NH3 после еды на 70-100 ед.	Лизинурическая непереносимость белка
7.	 уровня глютамина		Повышение уровня аммиака
			Длительный отстой крови

Моча

Анализ АК в мочи менее информативен, чем в плазме, так как в почечных канальцах аминокислоты обычно реабсорбируются; поэтому едва заметные изменения, которые происходят в гомеостазе АК, нельзя распознать с помощью анализа мочи. Используются два разных метода: стандартный количественный анализ и качественная оценка с помощью тонкослойной или бумажной хроматографии. Качественный анализ, будучи сравнительно недорогим, предоставляет информацию о функционировании почечных канальцев и дает возможность обнаружить некоторые аминоацидопатии; поэтому он наиболее частое используется как составная часть обычного селективного скрининга на метаболические заболевания. Количественный анализ АК в мочи нужно проводить в том случае, если подозревается наличие такого дефекта реабсорбции почечных канальцев, как цистинурия; он должен использоваться в сочетании с анализом плазмы при гипераммониемии в тех случаях, если повышенная экскреция специфических АК (например, аргининосукцината) в мочу может иметь диагностическое значение для некоторых дефектов орнитинового цикла.