Кровяно-капельная реакция минкевича (ра)

Принцип метода: основан на использовании для РА цельной крови без отделения кровяных клеток, но с их предварительным лизисом под влиянием дистиллированной воды.

На обезжиренное предметное стекло нанести каплю крови и каплю дистиллированной воды. В капле образовавшегося гемолизата эмульгировать каплю диагностикума. Покачивая стекло, учесть наступившую реакцию. Контролем служит физ. раствор с диагнустикумом.

При этом в опытной капле — на фоне красного гемолизата видны белые хлопья агглютината (сначала по периферии, затем — по всей капле). В контроле наблюдается общее помутнение.

Приложение 7

ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ (ПАССИВНОЙ) РЕАКЦИИ ГЕМАГЛЮТИНАЦИИ (РНГА ИЛИ РПГА)

Принцип РНГА основан на способности эритроцитов адсорбировать на своей поверхности микробные антигены. Сенсибилизированные таким образом эритроциты агглютинируются в присутствие гомологичной для антигена сыворотки с антителами. При этом реакция идёт между микробным антигеном и антителами, а эритроциты пассивно через них вовлекаются в этот процесс. Для постановки РНГА необходимы эритроциты, обработанные танином, на которых адсорбированы специфические антигены возбудителя. Антигенами в РНГА могут служить очищенные антигены соответствующих микробов, экстракты бактериальных взвесей, надосадочные жидкости формалиновых, спиртовых, гретых бактериальных вакцин, вирусов. Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в лунках иммунологического планшета.

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ

Ингредиенты	Разведение сыворотки								Контроли антигена
	1:10	1: 20	1: 40	1: 80	1: 160	1:320	1:640	1:2800	На спон-танную агглюти-нацию	На специфич- нось реакции
Физ. раствор, в мл	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	-	-
Испытуемая сыворотка в разведении 1:5 в мл, инактивированная 30мин при +56 C°	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5 вылить	-	-
Эритроцитарный диагностикум, в мл	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
Контрольная положительная сыворотка	-	-	-	-	-	-	-	-	-	0.5
Контрольная отрицательн-ая сыворотка	-	-	-	-	-	-	-	-	0.5	-
Результат (пример)	++++	++++	++++	+++	++	+	-	-	++++	-

Результаты реакции учитывают через 2 часа инкубации при + 37Сº и вторично — через 24 часа стояния при комнатной температуре. Их оценка зависит от характера осадка эритроцитов.

+ + + +	Резко положительная реакция: эритроциты равномерно покрывают всю лунку планшета в виде разрыхлённого зонтика с неровными краями
+ + +	Положительная реакция: почти все эритроциты агглютинированы и покрывают дно, края неровные
+ +	Большинство эритроцитов не агглютинированы, осели на дно, изредка встречаются мелкие хлопья склеенных эритроцитов. Слабая РПГА
-	Скопление эритроцитов имеет вид маленького, довольно плотного диска (пуговка).

Титром сыворотки считают последнее её разведение, которое вызывает склеивание эритроцитов при полном или почти полном просветлении надосадочной жидкости (2 плюса).

Приложение 8