Приготовление гемолитической системы

1. Отдельно готовят 3% взвесь эритроцитов барана: З мл, отмытых в 0,85 % физиологическом растворе эритроцитов помещённых в 97 мл. физ. раствора.

2. В отдельной колбе готовят гемолитическую сыворотку с учетом рабочего титра.

3. К 3% взвеси эритроцитов барана добавляют равный объем гемолитической сыворотки в рабочем титре. Гемолитическая система готовится за 15-20 мин. до постановки реакции. Для, сенсибилизации подготовленную систему устанавливают в термостат при +37С° на 15-20 мин.

Приложение 17

Реакция торможения связывания комплемента - ртск

Принцип метода. При наличии неполных антител в сыворотке крови больного возможна блокада ими антигена (диагностикума) и получение ложных отрицательных результатов. Для контроля в этом случае ставят РТСК с применением в качестве дополнения заведомо положительной иммунной сыворотки с полными антителами.

Схема постановки РТСК

Ингредиенты	Опыт РСК	Контроль положительн. АТ	Опыт РТСК
Сыворотка крови больного, инактивирована при + 56 С° 30 минут	0,5	-	0,5
Антиген в рабочей дозе, мл.	0,5	0,5	0,5
Физиол. раствор 0,85 %, мл.	-	0,5	-
Комплемент в рабочей дозе, мл.	0,5	0,5	0,5
Инкубировать при + 37С° 45 —60 минут
Заведомо положительная иммунная сыворотка, инактивированная при + 56 С° 30 мин.	-	0,5	0,5
Инкубировать при + 37С° 45 —60 минут
Гемосистема (готовая), мл	1,0	1,0	1,0
Инкубировать при + 37С° 45 —60 минут
Результат	Гемолиз	Гемолиза нет	Гемолиз

Условие: у больного есть неполные антитела.

Приложение 18

Реакция нейтрализации бактериальных экзотоксинов

Проводится ин виво (на больных людях, морских свинках, мышах) и ин витро — в реакции флокуляции, на плотной среде. Применяется для идентификации бактериального экзотоксина по его видовой и типовой принадлежности, а также для определения наличия и силы антитоксина в исследуемой сыворотке, титра анатоксина.

Бактериальный экзотоксин в смеси с гомологичной сывороткой (антисывороткой) не разрушается, а нейтрализуется. Нейтрализация наступает в строго определенных пропорциях (необходим избыток антитоксина) и при одномоментном добавлении всего количества антитоксина к токсину. При дробном добавлении токсина, с интервалами смесь остается токсичной (феномен Дениша), поскольку первые порции адсорбируют и изымают антитела, последующие порции остаются токсичными, не нейтрализованными.

Примеры постановки на человеке (в настоящее время не используются):

а) больном скарлатиной – феномен гашения сыпи. См. приложение 9;

б) на здоровом – оценка напряжённости иммунитета к дифтерии (проба Шика), скарлатине (проба Дика).