2.1 Определение массовой доли витамина с в молоке ускоренным методом

2.1.1 Сущность метода

В основе метода лежит способность аскорбиновой кислоты обесцвечивать окрашенный раствор индикатора 2,6-дихлорфенолиндофенола ( его натриевой соли) восстановлением его в кислой среде. В результате реакции аскорбиновая кислота переходит в дегидроаскорбиновую, а окрашенный в синий цвет индикатор (краска) восстанавливается до бесцветной формы. В эквивалентной точке избыток краски в кислой среде дает розовое окрашивание. По количеству индикатора 2,6-дихлорфенолиндофенола, израсходованного на окисление рассчитывают содержание последней в молоке.

Обычно титрование аскорбиновой кислоты индикатором ведут в прозрачном растворе (фильтрате), поэтому для анализа молока необходимо удалить из него белки. В рассматриваемом ниже ускоренном методе вместо осаждения белков предусматривается разбавление молока водой.

3.1.2 Последовательность определения

Молоко (5 см³) разводят дистиллированной водой в соотношении 1:2. В коническую колбу вместимостью 25-50 см³ вносят 1 см³ 2 %-й соляной кислоты и 5см³ разведенного молока, доводят объем водой до 15 см³.Осторожно взбалтывая, содержимое колбы титруют из микробюретки 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола (ДИФ), приливая его по каплям до появления слабо-розового окрашивания, сохраняющегося в течение 0,5-1 мин. Проводят два параллельных определения в одной порции разведенного молока.

Для каждого анализа делают поправку на реактивы. В коническую колбу наливают 1 см³ 2 %-ой соляной кислоты и такое количество воды, чтобы получился объем, который был при титровании исследуемого объекта. Затем добавляют из микробюретки по каплям раствор 2,6-ДИФ до первого появления розовой окраски. Количество израсходованного раствора 2,6-ДИФ (см³) является поправкой на реактивы. Поправка обычно составляет для титруемого объема 0,04- 0,06 см³ и вычитается из объема раствора 2,6-ДИФ, пошедшего на титрование экстракта.

Массовую долю аскорбиновой кислоты (В, мг%) вычисляют по формуле

(1)

где V - объем раствора 2.6-ДИФ, пошедшего на титрование, за вычетом поправки на реактивы, см³;

К - титр раствора 2,6-ДИФ;

V_м - объем разведенного молока, взятого для анализа, см³; V_м = 5 см³;

3 - разведение молока.

Для установки титра раствора 2,6-ДИФ по йодату калия несколько кристаллов аскорбиновой кислоты растворяют в 50 см³ 2%- ой серной кислоты. Из полученного раствора отбирают одной и той же пипеткой 5 см³ раствора для титрования рабочим (приблизительно 0,001 н) раствором 2,6-ДИФ и 5 см³ для титрования точно 0,001 н раствором KIO₃ (из фиксанала).

Титрование раствором KIO₃ ведут в присутствии нескольких кристаллов йодата калия и 2-3 капель 1%-го раствора крахмала до появления голубого окрашивания. Титрование раствором 2,6-ДИФ проводят до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 3 мин. Титр (К) раствора 2,6-ДИФ по аскорбиновой кислоте рассчитывают, исходя из того, что 1 см³ 0,001 н раствора йодата эквивалентен 0,088 мг аскорбиновой кислоты, по формуле

(2)

где V₁ - объем 0,001 н раствора KIO₃, пошедшего на титрование, см³;

V₂ - объем раствора 2,6-ДИФ, пошедшего на титрование, см³.

Таким образом, узнают, какому количеству аскорбиновой кислоты (в мг) соответствует 1 см³ раствора 2,6-ДИФ.