3.2.6 Риф, фпиа

Флюоресценция - это свечение вещества при освещении его светом. При этом свечение происходит на более длинной волне, чем длина волны освещающего света. Физика процесса заключается в возбуждении молекул с последующим переизлучением света через короткий промежуток времени. Вследствие потерь энергии при внутримолекулярных переходах длина волны переизлученного света больше, чем первичного, возбуждающего излучения. При этом спектр возбуждающего излучения обычно близок спектру поглощения флюорофора, а спектр флюоресценции мало специфичен.

Основное предположение метода состоит в том, что сила света флюоресценции пропорциональна количеству флюорофора, что выполняется для сильно разбавленных растворов, для которых нет поглощения как возбуждающего, так и излучаемого света веществом раствора.

Облучая флюоресцентное вещество обычно используют длину волны, наиболее специфичную для данного флюорофора, в то время как переизлученный свет анализируется на длине волны, где сила света максимальна (из-за его малой специфичности).

Использование явления поляризации основано на том, что молекула флюорофора, находясь в непрерывном движении, успевает повернуться на определенный угол за время переизлучения света, вследствие чего поляризация переизлученного света отличается от поляризации возбуждающего света. Угол поворота зависит от размера молекулы. Для маленькой молекулы флюорофора он будет значительно больше, чем для большого комплекса АГ-АТ, несущего флюоресцентную метку. В результате поляризация света, переизлученного комплексом АГ-АТ будет совпадать с поляризацией возбуждающего излучения, в то время как несоединенные молекулы флюорофора будут испускать свет с иной поляризацией.

Использование явления поляризации позволяет избежать процедуры сепарации продуктов иммунной реакции и реактива.

Заметим, что РИФ в качестве метки может использовать фермент (например, щелочную фосфатазу), который катализирует реакцию превращения нефлюоресцентного субстрата (4-метилумбелиферил фосфат) во флюоресцентное вещество (метилумбелиферон), которое и детектируется во флюориметре.

Применение в анализаторах: AxSym (Abbott).

3.3 Сравнение методов анализа

Наиболее важным показателем для экспресс анализатора является время, затрачиваемое на одно измерение. Так же немаловажной характеристикой, влияющей на автономное время работы системы является зависимость от расходных материалов. Сравнение методов приведено в Таблице 1.

Таблица 1. Сравнение методов анализа

Название метода	Время обработки одного образца	Необходимость в дополнительных расходных материалах (за исключением антител и промывочного раствора)
Coated Tube	2-4 часа [5]	нет
Пластиковый шарик	1 час [6]	нет
Парамагнитные частицы	9-18 минут [7]	да
РИА	2-3 часа	да
ИФА	1 час	нет
РИФ	2-5 минут	нет

Наименьшим временем для проведения анализа обладает поляризационный флюорисцентный иммуноанализ. Помимо высокой скорости проведения анализа этот метод проводится с небольшим количеством образца (до 20 мкл).

3.4 Методика забора крови.

Так как ПФИА нет необходимости в большом количестве крови и тест будет проводиться только на один тип антител, то нет необходимости в заборе крови с помошью вакуумной пробирки из вены. Для экспресс анализа подойдет копилярная кровь из пальца.

Для забора крови применяются вакуумные пробирки. Вакуумные пробирки позволяют избежать попадания посторонних веществ в пробирку и упрощают процесс забора крови. Пробирка должна содержать ЭДТА для предотвращения свертывания крови. Для ускорения процесса анализа возможно применение пробирок с содержаниемМетодика забора крови с помощью пробирки с капиляром приведена на Рисунке.

Рисунок 9 Методика взятия капилярной крови.

Применение пробирок, наполненных целевыми антителами позволит исключить из прибора реагенты. Так как метод измерения не требует вскрытия пробирки, то нет необходимости проводить дезинфекцию и очистку устройства, что уменьшает размер конструкции.