11 Основные методы исследования морфологии микробов. Микроскопия с использованием светового микроскопа, темного поля, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная.

- микроскопический метод: световая, фазово-контрастная, флуоресцентная, электронная; -культуральный метод (бактериологический, вирусологический);-биологический метод (заражение лабораторных животных);-молекулярно-генетический метод (ПЦР полимеразная цепная реакция)-серологический метод - выявления антигенов микроорганизмов или антител к ним;

Для световой микроскопии биологические объекты обычно окрашивают с целью выявления тех или иных их свойств. При этом ткани должны быть фиксированы, т.к. окраска выявляет определенные структуры только убитых клеток. В живой клетке краситель обособляется в цитоплазме в виде вакуоли и не прокрашивает ее структуры. Световой микроскоп- При обычной световой микроскопии наблюдаемый объект (в том числе и микробы) рассматриваются в проходящем свете. Темнопольная микроскопия — метод микроскопического исследования объектов, не поглощающих свет, плохо видимых при методе светлого поля. При темнопольной микроскопии объекты освещаются косыми лучами или боковым пучком света. При этом в объектив микроскопа попадают только лучи, рассеянные объектами, находящимися в поле зрения. Фазово-контрастная микроскопия — метод микроскопического наблюдения прозрачных, неокрашенных, не поглощающих света объектов, основанный на усилении контраста изображения. Люминесцентная микроскопия — метод световой микроскопии, позволяющий наблюдать первичную или вторичную люминесценцию микроорганизмов. Люминесценция — особый вид свечения, которое возбуждается коротковолновой частью видимого света либо ультрафиолетовыми лучами. Электронная микроскопия — метод морфологического анализа с помощью потока электронов. Роль оптических линз выполняют электрические и магнитные поля. Метод используется для выявления вирусов с диагностической целью, например рота-вирусов в фильтратах фекалий.

12. Субклеточные формы бактерий. Протопласты, сферопласты, L-формы. Они бывают различной формы - шаровид­ной, палочковидной и извитой. Шаровидные бактерии носят общее название - кокки. Встречаются они в виде одиночных клеток - микрококки, соединенных попарно - Диплококки, по четыре - тетракокки, в виде цепочек- стрептококки; иногда кокки составляют группировки в виде одиночных пакетов по восемь клеток или из нескольких пакетов - сардины. Они образуют также скопления, напоми­нающие виноградные грозди, - стафилококки.Палочковидные бактерии имеют форму одиночных, соеди­ненных попарно или цепочкой палочек. Соотношение между длиной и толщиной палочек может быть различным.Извитые (изогнутые) бактерии различаются не только по длине и толщине, но и по степени извитости (изогнутости). Па­лочки, изогнутые в виде запятой, называются вибрионами; па­лочки с одним или несколькими завитками - спириллами; длинные палочки с множеством завитков - спирохетами. Форма бактериальной клетки и ее размеры не являются по­стоянными. Они могут изменяться в зависимости от условий обитания микроба, а также от возраста микробной клетки. Сферопласт  бактериальная клетка с частично разрушенной клеточной стенкой, характеризующаяся неустойчивостью к изменениям осмотического давления. Протопласты- клетки микроорганизмов, полностью утратившие клеточную стенку. Могут образовываться в результате мутаций. L-формы - это бактерии, полностью или частично лишенные клеточной стенки (протопласт +/- остаток клеточной стенки), поэтому имеют своеобразную морфологию в виде крупных и мелких сферических клеток. Способны к размножению.

13. Тинкториальные свойства микроорганизмов. Красители. Простые и сложные методы окрашивания. Механизм воздействия красителя со структурами бактериальной клетки. Особенности строения Грам^- и Грам⁺ бактерий.

Различают простые и сложные методы окраски. Простые за­ключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последо­вательное использование нескольких красителей и имеют диффе­ренциально-диагностическое значение. Отношение микроорганиз­мов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

Простой метод. Фиксированный мазок окрасить каким-либо одним красителем, например фуксином водным (1—2 мин) или метиленовым синим (3—5 мин), промыть водой, высушить и микроскопировать. Сложные методы. Последовательно нанести на препа­рат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Существуют несколько основных окрасок: по Грамму, по Цилю-Нельсону Нейссера, Бури-Гинса, Грамположительные кокки: стафилококки (от стафило - гроздья) - имеют форму виноградных гроздьев; стрептококки - имеют вид цепочек; энтерококки - располагаются парами или короткими цепочками. Вызывают инфекционные эндокардиты (в 9% случаев), поражения мочеполовой системы и дисбактериозы кишечника. Грамотрицательные кокки: нейссерии (обычно располагаются попарно); гонококки (Neisseria gonorrhoeae) - возбудители гонореи; менингококки (Neisseria meningitidis) - возбудители назофарингитов, менингитов