3. Световой микроскоп, его устройство, разрешающая сила и работа с ним в микробиологической лаборатории. Микроскопическое изучение микробов в световом, люминесцентном и других микроскопах.

Микроско́п (от греч. μικρός — малый и σκοπεῖν — смотрю) — оптический прибор для получения увеличенных изображений объектов (или деталей их структуры), невидимых невооружённым глазом.

 С помощью микроскопов определяли форму, размеры, строение и многие другие характеристики микрообъектов. Оптический микроскоп в видимом свете давал возможность различать структуры с расстоянием между элементами до 0,20 мкм. Устройство микроскопа Оптическая система микроскопа состоит из основных элементов — объектива и окуляра. Они закреплены в подвижном тубусе, расположенном на металлическом основании, на котором имеется предметный столик. Увеличение оптического микроскопа без дополнительных линз между объективом и окуляром равно произведению их увеличений В современном микроскопе практически всегда есть осветительная система (в частности, конденсор с ирисовой диафрагмой), макро- и микро- винты для настройки резкости, система управления положением конденсора. В зависимости от назначения, в специализированных микроскопах могут быть использованы дополнительные устройства и системы. Устройство микроскопа входят : Объективы, Окуляры, Система освещения препарата Конденсор(система линза) В бактериологии обычно используют полезное увеличение в 900 раз (объектив -90 х, окуляр- 10 х). Разрешающая способность С.М 0,2 мкм. С источником УФЛ она может быть повышена до 0,1 мкм Для изучения объектов, к-рые меньше 0,2 мкм и обладают малой контрастностью, используют микроскопию в отраженном свете,  Люминесцентные микроскопы Принцип действия люминесцентных микроскопов основывается на свойствах флюоресцентного излучения. Микроскопы используются для исследования прозрачных и непрозрачных объектов. Люминесцентное излучение, по-разному отражается различными поверхностями и материалами, что и позволяет успешно применять его для проведения иммунохимических, иммунологических, иммуноморфологических и иммуногенетических исследований. Используют в методах ИФА

4. Простые и сложные методы окраски микробов (по Циль-Нильсену, Нейссеру, Романовскому-Гимза), их применение.

Окраска по Циль-Нильсену:

1. на фиксированный мазок наносят карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров в течении 3-5 мин.

2. снимают бумагу, промывают мазок водой.

3. На мазок наносят 5% раствор серной кислоты или 3% раствор солянокислого спирта на 1-2 мин. для обесцвечивания.

4. Промывают водой.

5. Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин.

6. Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

При обработке препарата серной кислотой некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет, а кислотоустойчивые бактерии остаются окрашенными фуксином в красный цвет.

Окраска по Нейссеру:

1. На фиксированный мазок наносят ацетат синьки Нейссера на 2-3 мин.

2. Наносят раствор Люголя на 10-30 сек.

3. Промывают препарат водой.

4. Мазок докрашивают водным раствором везувина или хризоидина в течение 0,5-1 мин.

5. Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Зерна волютина окрашиваются в темно-синий цвет, а цитоплазма клетки- в желтый.

Окраска по Романовскому-Гимза:

Позволяет выявить ядерные элементы бактериальных клеток и зерна волютина. Для окраски берут каплю готовой краски на 1мл воды, которая должна быть подщелочена до pH- 7,2.

1. поместить препарат (мазком вниз) в чашку Петри, подложив под края стекла спички или кусочки предметных стекл.

2. подлить краску сбоку так, чтобы она без пузырей подтекла под мазок (краситель 1-24ч)

3. промыть водой и высушить.

Протоплазма молодых клеток окрашивается в сине-фиолетовый цвет, ядерные элементы- в красно-фиолетовый.