Данные для приготовления стандартных растворов

№№ пробы	Исходный стандартный раствор, см3	Вода, см3	Реактив Несслера, см3	Концентрация азота (с) в см3 раствора, мкг	Экстинция при 420 нм
					Е1	Е2	Е3
Контр.	0	5,00	0,5	0
1.	0,25	4,75	0,5	1
2.	0,50	4,50	0,5	2
3.	1,00	4,00	0,5	4
4.	1,50	3,50	0,5	6
5.	2,00	3,00	0,5	8
6.	2,50	2,50	0,5	10

Полученные значения Е вносят в таблицу и на основе этих данных сроят калибровочную кривую, как показано на рис. 2. На оси абсцисс откладывают концентрации азота в мкг/см³, на оси ординат – экстинцию. Полученные точки соединяют прямой, выходящей из точки пересечения осей.

Для большей точности каждую точку делают в нескольких повторностях и получают несколько значений Е (Е₁, Е₂, Е₃), используя параллели рабочих стандартных растворов (не менее трёх).

Рис. 2. Гипотетическая калибровочная кривая для определения азота по методу Несслера (Е – экстинция, с – концентрация азота в мкг/см³).

Определение результатов по калибровочной кривой. При дальнейшей работе нет необходимости каждый раз заглядывать в калибровочную кривую для определения результата. Более точные результаты получают путём умножения экстинции на коэффициент пересчёта (К), который является коэффициентом пропорциональности между экстинцией и концентрацией вещества в растворе. Этот коэффициент равен котангенсу угла наклона калибровочной кривой к оси абсцисс (см. рис. 2):

(1.4.5.)

Коэффициент легко рассчитать. Например, на калибровочной кривой (рис. 2) точке с концентрацией рабочего стандартного раствора 8 мкг/см³ соответствует экстинця 0,5, следовательно, исходная из зависимости

Из зависимости следует, что , поэтому в дальнейшем при определении концентрации азота достаточно умножить показание ФЭК на этот коэффициент, чтобы получить определяемое значение.

Следует помнить, что прямо пропорциональная зависимость между Е и С существует только в определённом интервале концентраций. Этот интервал и определяет чувствительность метода. Концентрация определяемых колориметрическимим методами соединений в опытных пробах должны быть в пределах чувствительности метода.

Чувствительность метода Несслера примерно 1-10 мкг N/см³, что соответствует интервалу экстинций по нашей гипотетической калибровочной кривой (рис. 2) примерно 0,06-0,62. Следовательно, если показание прибора выйдет за пределы этого интервала, то определение следует повторить, предварительно сделав соответствующее разведение определяемого раствора.

Вычисление результатов. Для определения содержания азота в дрожжах сначала необходимо определить их влажность (W) в отдельном эксперименте. Расчёт процентного содержания общего азота в биомассе абсолютно сухих дрожжей (АСД) проводят по формуле:

, (1.4.6.)

где Е – среднее арифметическое значение экстинций при колориметрировании в нескольких параллельных опытах;

К – коэффициент пересчёта (1.4.5.), определяется экспериментально после построения калибровочной кривой;

Р – масса в мг навески дрожжей, взятых на сжигание;

W – влажность дрожжей в %, определяется экспериментально;

2500 – коэффициент, учитывающий все разведения и пересчёты.