2. Методы сбора качественных и имагинальных проб

Т.М. Тиунова, Е.А. Макарченко, В.А. Тесленко

2.1 Методы сбора.

Для выявления видового разнообразия водотока необходи­мо дополнительно с количественными пробами проводить отбор качественных и имагинальных материалов.

Отбор качественных проб осуществляется с помощью стандартных гидро­биологических орудий: сачков, скребков, дрифтовых ловушек, выбор которых зависит от размера водотока, его глубины и скорости течения. Сбор имагинального материала проводится метом кошения прибрежной растительности и с помощью световых ловушек.

Большинство личинок амфибиотических насекомых населяют прибрежную зону водотоков и доступны для сбора с берега. Для этого достаточно иметь сачок из материи, хорошо фильтрующей воду. Обычно для этой цели используется мельничный газ N 15-32. Обод и палка сачка должны быть крепкими, не гнущимися. Обод (диаметром около 25 см) обшивается полосой плотной ткани, шириной 10-15 см. К этой полосе пришивают колпак сачка из фильтрующей ткани. Колпак шьется как шапка, из трех или четырех лопастей, чтобы дно сачка было широкое, закругленное. Для отбора проб в водотоках наиболее удобен сачок треугольной формы.

Сбор в водоемах и реках со слабым течением проводится или среди зарослей водной растительности, или зачерпывают ил, промывая его в том же сачке до тех пор, пока вода вокруг сачка перестанет мутиться. Личинок из песка необходимо добывать отмучиванием. Порцию песка, добытую сачком или другим орудием сбора, помещают в ведро или таз и заливают водой. Песок сильно взмучивают рукой или вращательными движениями сосуда и вскоре после этого сливают муть с песка в сачок. При взмучивании песка его обитатели некоторое время удерживаются в воде и попадают в сачок.

Растения, крупный детрит и т.п., собранные сачком, помещают в широкогорлую банку или полиэтиленовый пакет. Если сортировка проводится на месте, то проба заливается водой, если в лаборатории, то фиксируется. Для этого материал из сачка или банки перекладывают небольшими порциями в белую ванночку или тарелку, заливают водой и пинцетом или пипеткой отбирают личинок.

Личинок, живущих в моховых и водорослевых обрастаниях камней, собирают путем выполаскивания мха и водорослей в тазу с последующей промывкой отмытых частиц в сачке. Необходимо обращать особое внимание на биотопы из мокрого мха по берегам родников и горных ручьев.

В водотоках с каменистым и гравийно-галечниковым фунтами, высокой скоростью течения воды производится отбор проб методом «лягания», когда сачок устанавливается на стрежне реки и взмучивается грунт выше по течению. Поднятие и взмучивание грунта лучше всего делать ногами, имитируя лягание лошади или танец чарльстон. После сноса организмов вместе с листвой, грунтом и т.п. в сачок, проба отмывается и сортируется по группам. Хорошие результаты при сборе амфибионтов дает смыв с камней, которые вынимаются из воды, помещаются в таз, где с его поверхности счищаются все организмы вместе с перифитоном водорослей. Во время этой процедуры следует обращать внимание на трещины в камне, так как в них могут находиться домики-убежища из мелких песчинок личинок хирономид некоторых видов Diamesinae и Orthocladiinae и других двукрылых. На скалистых грунтах при сборе личинок может быть использован сачок-скребок.

Сбор животных, обитающих глубже, чем позволяет работать ручка сачка, осуществляется при помощи драги или малой модели дночерпателей Петерсена или Экмана-Берджа. Отлов беспозвоночных в глубоких равнинных реках производится дрифтовыми ловушками, установленными на тросе, натянутом поперек реки в поверхностном или придонном горизонте.

Хорошими коллекторами беспозвоночных являются бентосоядные рыбы. В их желудках часто встречаются редкие виды, которые невозможно добыть ни одним пробоотборником.

Качественные пробы бентоса фиксируют 75%-ым этанолом или 4%-ым раствором формальдегида. Имагинальные сборы фиксируются этанолом или жидкостью Удеманса.

Материал, собранный и фиксированный для любой цели, должен быть снабжен этикеткой с обязательным указанием даты, биотопа, места сбора, географического или административного района, фамилии сборщика.

2.2. Некоторые особенности сбора и фиксации личинок амфибиотических на­секомых.

Поденки. Имаго и субимаго поденок хранят только в 75 %-ом этаноле, можно с небольшой добавкой глицерина. Для поденок очень важно, чтобы ем­кость, в которую помещаются животные, была заполнена фиксатором практи­чески до верха. Это связано с тем, что у личинок часто осыпаются жаберные листки, по которым иногда идет определение, а у имаго передние ноги. Осо­бую ценность при сборе поденок имеют экземпляры, выведенные из зрелых личинок, с сохранением личиночной и субимагинальной шкурок. Для этого отлавливают зрелых нимф с темными крыловыми чехликами. Это указывает на их готовность к переходу в крылатую фазу. Отловленных нимф отсаживают в выводные садки, которые представляют собой цилиндрические каркасы, обтя­нутые мельничным газом. Садок устанавливается в водоеме таким образом, что его верхняя часть находится над водой. Вылетевшее субимаго отсаживает­ся в другой меньший садок, где оно в течение 12-48 часов еще раз линяет. Сад­ки с субимаго помещают в затененное прохладное место.

Веснянки. Для идентификации лучше всего использовать зрелых личино с хорошо развитыми крыловыми чехликами. Для выведения имаго из личинок: зрелых нимф отлавливают и помещают в садки, различной конструкции. В садках обязательно должен присутствовать влажный субстрат в виде мха или других компонентов. Садки помещают в прохладное место (в полевых услови­ях в тень) или холодильник.

Хирономиды. Собранных тем или иным способом личинок хирономид или фиксируются, или выращивают для получения комаров. Считается, что для таксономического изучения личинок хирономид, лучшим фиксатором служит горячий 70%-й этиловый спирт. В случае предполагаемого кариологического анализа личинок фиксируют в смеси" этанол – ледяная уксусная кислота (3:1) и хранят в холодильнике. Для этой цели желательно использовать личинок конца IV возраста, которых легко можно распознать по слегка вздувшимся грудным сегментам. Концентрация этилового спирта должна быть не ниже 96% Можно также использовать метиловый спирт. Для личинок подсемейств Podonominae, Diamesinae, Prodiamesinae и Orthocladiinae очень важно использовать смесь этанол-ледяной уксусной кислоты, приготовленную за несколько минут до фиксации и в первый час после фиксации желательно сменить раствор не менее 5 раз на свежеприготов­ленный. Желательно также в течение суток поменять раствор 2-3 раза. По возможности перед фиксацией личинок выдержать около 30 минут в чашке Петри или другом сосуде. Затем каждую личинку быстро обсушить на фильтровальной бумаге и поместить в пузырек со смесью этанол-ледяная уксусная кислота. Оптимальное количество личинок среднего размера в пузырьке объемом около 12 мл - 5-6.

Для точного определения вида личинок хирономид часто необходимо выведение из них взрослого насекомого, желательно самца (по самкам определить видовую принадлежность большинства подсемейств в настоящее время нельзя).

2.3 Изготовление препаратов.

При определении личинок поденок, весня­нок и ручейников иногда необходимо изготовление временных препаратов.

Хорошо заточенными иглами отчленяются ротовые части, хвостовые нити пр. После этого они вывариваются 2-3 минуты в 10%- ном растворе едкого калия или выдерживаются в нем 1-2 суток до полного растворения мышц, за тем промываются в дистиллированной воде и монтируются на предметном стекле в капле воды или глицерина. В постоянном препарате вместо глицерина используется жидкость Фора-Берлезе. Постоянный препарат закрывают покровным стеклом, края которого окантовывают бесцветным лаком для ногтей.

При определении личинок хирономид необходимо изготовить временный или постоянный препарат на предметном стекле, где хорошо должны быть видны морфологические структуры, имеющие значение в диагностике. Для: изготовления препарата личинки желательно использовать несколько экземпляров одного вида. Один экземпляр уложить спиной вверх, чтобы можно было рассмотреть окраску фронтального и щечных склеритов головы,¹ распределение мелких шипиков на сегментах брюшка, строение подставок прианальных кисточек и задних подталкивателей. Второй экземпляр следует смонтировать на боку, чтобы было видно положение глаз, строение антенны, передних подталкивателей и заднего конца тела. У третьего экземпляра используется только голова. От нее отчленяются тонкими препаровальными иглами и укладываются под отдельное покровное стекло верхняя губа мандибулы, максиллы, антенны, ментум, гипофаринкс. Нередко в определени личинок важно знать окраску гулярного и затылочного склеритов, а также ширину последнего. Для этого монтируется целая голова (ментумом вверх) предварительно вываренная в 5-10%-ном растворе едкого калия и отмытая дистиллированной или кипяченой воде.

Когда производится массовое определение личинок из гидробиологических проб, можно делать временный препарат целой личинки в глицерине, или называемый давленый препарат головы. При этом голова, помещенная в каплю глицерина ментумом вверх, немного раздавливается покровным стеклом, таком препарате обычно неплохо видны части головы, имеющие большое значение в диагностике личинок. Для таксономического изучения и длительного хранения личинок хирономид следует готовить постоянные препараты, заделывая части головы и тела в жидкость Фора-Берлезе, канадский бальзам, эупараль или желатин-глицерин. Наиболее удобна для постоянного препарата жидкость Фора-Берлезе, так как в нее можно заключать части личинок, фиксированных как спиртом, так и формалином без специальной обработки или промывки.

Жидкость Фора-Берлезе готовится следующим образом. Берутся по массе: вода дистиллированная - 50, хлоралгидрат - 200, глицерин - 20, сухой гуммиарабик - 30 частей. Гуммиарабик растворяют в воде, затем добавляют глицерин и хлоралгидрат. Эту смесь нагревают в банке с притертой пробкой на водяной бане до полного растворения, после чего фильтруют через стекловату. Изготовленные препараты окантовывают бесцветным лаком. Препараты лучше хранить в горизонтальном положения на планшетах, которые помещаются в картонные коробки.