27 Вопрос (Бактериологический метод исследования, его этапы).

Цель метода: выделение культуры возбудителя из исследуемого материала, с последующей идентификацией и определение факторов патогенности и антибиотикочувствительности.

Этапы:

1 день (1 этап) – посев исследуемого материала (гной, испражнения, раневоеотделяемое, мокрота) на питательную среду. Инкубируем в термостате 24-48 часов при температуре 37 градусов.

2 день (2 этап) – изучение культуральных признаков: описание колоний, выросших на питательной среде (величина, цвет, прозрачность, консистенция, влажность). При необходимости подсчет колоний. Изучение морфологических и тинкториальных св-в: приготовление микропрепарата из подозрительных колоний, окраска по Грамму.

2 день (3 этап) – пересев на скошенный МПА для выделения чистой культуры. Инкубируем в термостате 24-48 часов при температуре 37 градусов.

3 день (4 этап) – идентификация чистой культуры:

- изучение морфологических и тинкториальных св-в

- изучение биохимических св-в: сахаролитической активности (на средах Гисса) и протеолитической активности (определение индола, сероводорода, аммиака), разжижение желатина.

- обнаружение фермента каталазы

- определение факторов патогенности: токсинов (гемолизин, некротоксин), ферментов «агрессии» (плазмокоагулаза, гиалуронидаза)

- опыт бактериофагии

- Определение чувств-ти к антибиотикам.

28 Вопрос (Ферменты бактерий, их классификация. Значение ферментов в идентификации бактерий).

29 Вопрос (Изучение сахаролитической активности у бактерий).

Сахаролитические св-ва – расщепление сахаров. Для определения сахаролитических св-в из углеводов обычно используют лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу, маннит.

Среды Гиса состоят из пептонной воды, 1% углевода и индикатора Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью). В среду опускается поплавок, который при стерилизации заполняется средой. При сбраживании сахара бактериями, цвет среды меняется на красный, а газ скапливается в поплавке.

Полужидкие сахара состоят из0,7% мясопептонного агара, 1% сахара и индикатора рН (водно-голубая краска и розоловая кислота). Посев производится уколом. При ферментации сахара цвет среды становится голубым, при наличии газообразования по ходу посева видны пузырьки газа, сам агар разрывается.

30 Вопрос (Изучение протеолитической активности у бактерий. Обнаружение ф. Каталазы).

Протеолитические св-ва бактерий (расщепление белков) определяются обнаружением конечных продуктов ферментации белков(индола, сероводорода, аммиака) и по способности разжижать желатину (мясопептонный бульон с 10-25%желатин). Разжижать желатину способны микробы, выделяющие фермент типа коллагеназы. Процесс разжижения идет сверху, причем различные виды микробов дают характерную для них форму, потому это св-во также используется в целях идентификации бактерий.

31 Вопрос и 32 (Белковый и ионный обмены у микробов).

Обмен веществ, или метаболизм, у микроорганизмов складывается из процессов ассимиляции, или анаболизма, и диссимиляции, или катаболизма. В результате ассимиляции, усвоения питательных веществ, происходит увеличение сложности соединений. Так, из аминокислот синтезируются белки, из моносахаридов — полисахариды. Это приводит к синтезу новых компонентов клеток. При процессах диссимиляции, распада питательных веществ, наоборот, происходит расщепление сложных соединений на более простые, низкомолекулярные соединения. Часть их является продуктами обмена и выделяется из клетки, другие простые вещества используются для биосинтетических реакций и включаются в процессы ассимиляции. В процессе диссимиляции освобождается также энергия, необходимая для процессов обмена. Избыток энергии, освобождающийся в этих реакциях, накапливается в специальных богатых энергией соединениях (АТФ). Любые превращения питательных веществ в клетке (процессы синтеза клеточных элементов или процессы расщепления питательных веществ) совершаются с участием ферментов,