Опыт № 5. Осаждение белков спиртом Объект исследования: яичный белок
Реактивы:
Этиловый спирт
В пробирку наливают 1мл белка и добавляют равный объем этанола, образуется осадок.
Спирт дегидратирует молекулы белка, понижая их агрегативную устойчивость, аналогично на белки действует ацетон.
При добавлении к полученному осадку воды наблюдается растворение хлопьев белка (обратимое осаждение).
Опыт № 6. Денатурация белков
Пространственная структура белков способна нарушаться под влиянием ряда факторов – химических реагентов, повышенной температуры, изменения рН среды, облучения УФ-светом, механическом действии (например, сильном перемешивании растворов).
Разрушение природной (нативной) макроструктуры белка называется денатурацией. Первичная структура белка при денатурации сохраняется, а вторичная, третичная и четвертичная структуры разрушаются. У денатурированных белков снижается растворимость, и они легко выпадают в осадок, у них также исчезает биологическая активность.
а) Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
Объект исследования: раствор яичного белка
Реактивы:
Азотная кислота концентрированная
Серная кислота концентрированная
В две пробирки наливают по ~10 капель концентрированных кислот: в первую азотную, а во вторую серную. Наклоняют пробирку под углом 45о и в каждую осторожно по стенке пробирки наливают по каплям такой же объем белка (~10 капель) так, чтобы обе жидкости не смешивались. На границе двух слоёв жидкости образуется осадок в виде небольшого кольца. При добавлении избытка кислоты осадок исчезает.
б). Осаждение белков органической кислотой
Объект исследования: раствор яичного белка
Реактивы:
Раствор 10%-ный трихлоруксусной кислоты
В пробирку наливают ~1мл раствора белка и добавляют ~2-3 капли 10%-ной трихлоруксусной кислоты. Белок выпадает в осадок.
в). Осаждение белков фенолом
Объект исследования: раствор яичного белка
Реактивы:
Раствор 1%-ный фенола
В пробирку наливают ~1 мл раствора белка и такой же объем раствора фенола. Смесь мутнеет вследствие денатурации белка.
Г). Осаждение белков солями тяжелых металлов Объект исследования: раствор яичного белка
Реактивы:
Раствор 5%-ный ацетата свинца (II)
В две пробирки помещают по ~2 мл раствора белка. В каждую из них по каплям добавляют раствор ацетата свинца (до образования осадка). Затем в одну из пробирок добавляют избыток раствора ацетата свинца. Наблюдают пептизацию – образование коллоидного раствора.
Осаждение белков тяжелыми металлами – необратимый процесс.
д). Денатурация белков под воздействием температуры
Объект исследования: раствор яичного белка
В пробирку приливают ~1 мл раствора яичного белка. Содержимое пробирки нагревают в пламени спиртовки до появления помутнения или хлопьев.
УГЛЕВОДЫ
Углеводы входят в состав клеток и тканей растительных и животных организмов и по массе составляют основную часть органического вещества на Земле. В живой природе они имеют большое значение как источники энергии (в растениях – крахмал, в животных организмах – гликоген); структурные компоненты (целлюлоза, хитин); составные элементы жизненно важных веществ (витамины, нуклеиновые кислоты). Некоторые углеводы используются как производные при получении пищевых добавок, которые широко применяются в последнее время в пищевой промышленности.
Опыт №7. Получение кислотным гидролизом ксилозы из ксиланов
Ксилоза является составной частью полисахаридов ксиланов, содержащихся в древесине лиственных пород, соломе, отрубях, шелухе подсолнечника, скорлупе орехов и т.п., откуда может быть выделена кислотным гидролизом:
Объект исследования: мелкоизмельчённая шелуха подсолнечника
Реактивы:
Раствор 2н серной кислоты
Раствор 2н гидроксида натрия
Раствор 0,2н сульфата меди
В пробирку помещают на кончике шпателя шелуху подсолнечника и добавляют ~1 мл 2н серной кислоты. Реакционную смесь нагревают в пламени спиртовки, доводят до кипения и продолжают процесс ещё в течение 1-2 минуты. При нагревании необходимо пробирку держать наклонно и слегка встряхивать, чтобы раствор не выбросило. Пробирку охлаждают на воздухе, затем под струёй холодной воды. После охлаждения раствор переносят в другую пробирку и наливают 2н раствор гидроксида натрия, контролируя с помощью универсальной лакмусовой бумаги рН раствора в интервале 8-9. Затем приливают ~ 2 капли раствора сульфата меди и нагревают содержимое. Появляется желтое окрашивание, которое при длительном нагревании переходит в красный цвет. Это указывает на восстановление меди.
