37.По каким признакам можно судить о размножении вирусов в культуре клеток?

О размножении вирусов в культуре ткани можно судить по цитопатическому действию (ЦПД):

•деструкции клеток,

•изменению их морфологии,

•формированию многоядерных симпластов или синтиция в результате слияния клеток.

•в клетках культуры ткани при размножении вирусов могут образовываться включения - структуры, не свойственные нормальным клеткам.

Включения выявляются в окрашенных по Романовскому-Гимза мазках из зараженных клеток. Они бывают эозинофильные и базофильные.

По локализации в клетке различают:

•цитоплазматические,

•ядерные,

•смешанные включения.

Характерные ядерные включения формируются в клетках, зараженных вирусами герпеса (тельца Каудри), цитомегалии и полиомы, аденовирусами, а цитоплазматические включения - вирусами оспы (тельца Гварниери и Пашена), бешенства (тельца Бабеша-Негри) и другие.

38. Какие методы применяются для диагностики вирусного гепатита а?

Для диагностики, кроме заражения животных, предложены различные иммунологические методы: РСК, иммунофлуоресцентный метод, гемагглютинация иммунного прилипания. Однако применение этих методов ограничены из-за отсутствия специфический вирусных антигенов. Поэтому сейчас приемлем метод иммунносорбентного анализа твердой фазы в виде ИФМ или РИМ, особенно в модификации захвата иммуноглобулинов класса М. Принцип работы «ДИАГН-А-ГЕП»: на стенках полистероловых луночек сорбируются вначале антитела к иммуноглобулинам класса М, затем добавляется исследуемая сыворотка больного. Если в ней есть антитела класса IG M, они будут связываться анти-антителами М, затем добавляются специфический вирусный антиген, Система промывается, и к ней добавляются противовирусные антитела, меченные пероксидазой хрена. Если произойдетвзаимодействие всех 4 компонентов системы, возникает 4-хслойный «сендвич»:антииммуноглобулины М, иммуноглобулины М, вирусный антиген, антивирусныеантитела, меченные ферментом. Для обнаружения этого комплекса в луночки добавляют субстрат для фермента (под влиянием фермента он разрушается и образуется окрашенный продукт).

Также предложен метод ДНК-зонда: используют в качестве зонда ДНК комплементарную вРНК.

39. Как проникает в организм вирус гриппа, и из каких основных этапов складывается процесс его внутриклеточного размножения?

Вирус поступает в организм от человека и очень редко от животного, воздушно-капельным путем.

Адсорбция вируса на мембране клетки происходит благодаря взаимодействию его гемагглютинина с мукопептидом. Затем вирус проникает в клетку с помощью одного из 2 механизмов:

1. Слияние мембраны вириона с мембраной клетки

2. По пути окаймленная ямка – окаймленный пузырек – эндосома – лизосома – слияние мембраны вириона с мембраной лизосомы – выход нуклеокапсида в цитозоль клетки.

Второй этап «раздевания» вириона (разрушение матриксного белка) происходит на пути к ядру. Для транскрипции вирусу необходима затравка, т.к он сам не может синтезировать кэп (участок необходимый для распознавания мРНК рибосомой). Поэтому он с помощью своего белка РВ2 откусывает кэп от клеточной мРНК и проникает в ядро, полностью подчиняя себе клетку.

В ядре на вРНК синтезируются три типа вирусоспецифических РНК

1. Позитивные комплементарные РНК(мРНК), используемые в качестве матриц для синтеза вирусных белков

2. Полноразмерная комплементарная РНК(кРНК) – матрица для вирионных РНК

3. Негативная вирионная РНК(вРНК) – геном для вновь синтезируемых вирионов.

Немедленно, ещё до завершения синтеза, вРНК и кРНК вступают в ассоциацию с капсидными белками, которые поступают в ядро из цитозоля. В состав вирионов включаются только рибонуклеопротеиды, связанные с вРНК. Вновь синтезируемые молекулы вРНК после ассоциации с капсидными белками мигрируют из ядра в цитозоль.