Вопрос 87.Бактериологическая диагностика менингОкокковых инфекций.

Выделяют чистую культуру возбудителя и проверяют ее чувствительность к сульфаниламидным препаратам и антибиотикам.

Материал : спинномозговая жидкость , кровь, экссудат, гной, слизь из зева и носоглотки.

Вопрос 88.Бактериоскопическая диагностика Менингококковых инфекций.

С помощью микроскопии нативного патологического материала определяют вид возбудителя заболевания по форме, взаиморасположению и способности окрашиваться определенными красителями.

Материал : спинномозговая жидкость , кровь, экссудат, гной, слизь из зева и носоглотки.

Имеют форму, напоминающую пламя свечи : один конец клетки заострен, другой уплощен. Располагаются обычно парами (плоские концы обращены друг к другу), иногда в виде коротких цепочек. Жгутиков нет, спор нет. В организме человека и животных, на средах, содержащих кровь или сыворотку, образуют капсулу.

Грамположительны, но в молодых и старых культурах нередко грамотрицательны.

№ 89. Серологическая классификация менингококков

Менингококк имеет видоспецифические и полисахаридные антигены, по которым менингококки разделены на семь серологических групп, обозначаемых буквами A, В, С, D,X,Y,Z

№90. Иммунологическая диагностика менингококковых инфекций

Приготовленные из свежих культур менингококков различных серогрупп препараты обрабатывают сывороткой , а затем флюоресцирующей сывороткой против глобулинов человека. После этого препараты изучают в люминесцентном микроскопе.

№91. Специфическая профилактика менингококковых инфекций.

Для создания искусственного иммунитета против менингита предложены вакцины , получаемые из высокоочищенных полисахаридов серогрупп А, С, Yи W135, но каждая из них формирует группоспецифический иммунитет.Полисахарид серогруппы В оказался неиммуногенным.Поскольку после перенесенной болезни иммунитет возникает против всех серогрупп менингококков, возобновился поиск таких их антигенов( в том числе и серогруппы В), которые создавали бы надежный иммунитет против всех серогрупп, включая серогруппу В.

№ 92. Отличия пневмококков от других стрептококков.

Практическому здравоохранению предложен способ идентификации пневмококков с помощью теста на продукцию -гемолиза пневмококка вокруг диска с метициллином, в отличие от других -стрептококков, не образующих -гемолиз. В этих условиях т.е. метод, основанный на учете характера гемолиза. Этот метод несмотря на простоту выполнения характеризуется низкой чувствительностью, так как только 60% пневмококков обладают этим феноменом.

Известен метод дифференцировки пневмококков от других -стрептококков на основе изучения микроколоний этих микроорганизмов (С.Хаджиев, Н.Хаджиева //Ж. микробиол. N 11, 1987). Микроколонии пневмококков имеют вид зернистого неупорядоченного компактного образования, состоящего из плотно уложенных ланцетовидных диплококков, реже коротких цепочек, состоящих не более чем из 8 кокков. В отличие от них, -стрептококки других видов растут на фильтре, создавая четко обозначенные длинные цепочки. Однако следует отметить, что эти исследования затруднены трудоемкостью микробиологических исследований с большой затратой рабочего времени.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ идентификации пневмококков с помощью оптохинового теста, сущность которого заключается в определении чувствительности испытуемых культур к оптохину (Н.Н.Костюкова //Ж.Микробиол. N 12, 1981).

Постановка данного теста осуществляется на плотной питательной среде для выращивания пневмококков с помощью дисков, пропитанных оптохином. Установлено, что только пневмококки чувствительны к концентрации 1:4000 водного раствора оптохина, тогда как другие -стрептококки к данной концентрации резистентны. При этом зона ингибиции для пневмококка 16 мм. Метод отличается простотой и доступностью. Однако его применение весьма ограничено по следующим причинам. Во-первых, не налажен промышленный выпуск данного препарата, во-вторых, срок годности коммерческих зарубежных дисков с оптохином ограничен, и следовательно, производить закупки его весьма не экономично.

Для идентификации пневмококков авторы предлагают использовать отечественный препарат хинин, алкалоид, содержащийся в коре различных видов хинного дерева. Хинин белый кристаллический порошок без запаха, хорошо растворим в воде (1: 30), легко в кипящей (1:1), в спирте (1:3). Содержит 82% хинина (основания). Водные растворы стерилизуют при 100^оС в течение 30 мин. В отличие от оптохина хинин более стойкий препарат, отличается стандартностью, хорошей растворимостью и доступен для широкого применения в нашей стране. Формы выпуска отечественной промышленностью: порошок, таблетки по 0,25 и 0,5 г (М.Д.Машковский, Лекарственные формы, т.2, 1985).

Идентификация пневмококков осуществляется путем определения на 5% кровяном агаре чувствительности его к хинину с помощью стандартных дисков, нагруженных 0,6-0,8 мкг данного препарата на один диск

№93. Факторы патогенности менингококков.

Капсула- важный фактор патогенности менингококков, полисахаридной природы, нейтрализует фагоцитарную активность клеток , способствуя внутриклеточной персистенции.

Фимбрии(пили)обеспечитвают адгезию менингококков к клеткам эпителия носоглотки.

Белки наружной мембраны-комплекс множества белков на поверхности клеточной стенки, которые участвуют в прикреплении , проникновении менингококка

Колонизации способствуют факторы микробного антагонизма: бактериоцины, оксидаза и каталаза.

Эндотоксин-липоолигосахаридный комплекс, который индуцирует синтез цитокинов, проявляет пирогенность, имеет сходство с гликолипидами человека(антигенная мимикрия), обладает летальными свойствами( развитие токсического шока и диффузной внутрисосудистой коагуляции )

Гиалуронидаза-факторы распространения.нейраминидаза и фибринолизин-факторы инвазии.

Оксидаза и супероксиддисмутаза-факторы микробного антагонизма.

№94. Какие заболевания вызывают гонококки?

Эндометрит, аднексит, простатит, фарингит, проктит, коньюктивит( бленнорея новорожденных), специфический уретрит.

№95. Морфологические , тинкториальные, культуральные свойства гонококков.

Грам- диплококки, форма кофейных зёрен или почек, сложенных вогнутыми сторонами друг к другу.Неподвижны, спор не образуют, имеют нежную капсулу , пили IV типа.гонококки принадлежат к наиболее прихотливым бактериям .Оптимальный рост на средах с нативным сывороточным белком во влажной среде с содержанием в воздухе 3-10 % углекислого газа.для роста необходимо железо.добавление к плотным средам крахмала,холестерола, альбумина или частичек угля способствует росту, а добавление кальция повышает жизнеспособность.Характеризуется низкой сахаролитической активностью-ферментируют только глюкозу.Оксидазо- и каталазоположительны.Легко подвергаются аутолизу.На плотной среде образуют мелкие бесцветные колонии.Дифференцируют 4 вида гонококков(1,2,3,4)по морфологии колоний в боковом освещении в стериоскопическом микроскопе.гонококки 1 типа выявляются при острой гонорее, образуют колонии ярко-оранжевого цвета.Гонококки второго типа выделяются при бессимптомном течении болезни, образуют колонии голубовато-зеленого цвета.только у гонококков 1,2 типов обнаружены пили..гонококки 3 и 4 типов-музейные штаммы, образуют тусклые колонии без четкого разделения цветных полос.

№96.Бактериоскопическая диагностика гонореи.используется для диагностики хронической гонореи.  Наиболее распространенным методом лабораторной диагностики гонореи является бактериоскопическое исследование, при котором отделяемое мочеполовых органов наносят тонким слоем на предметное стекло, а затем окрашивают. http://www.doctoribolit.ru/images/Gonokokk.jpg     Гонококки хорошо прокрашиваются всеми основными анилиновыми красителями. Чаще всего употребляют 1% раствор водного или леффлеровского синего или 1% раствор эозина на 60-70% спирте и 1 % водный раствор метиленового синего. Мазок, высушенный на воздухе и фиксированный, на 15-30 с заливают раствором эозина, смывают водой и на 30 с заливают раствором метиленового синего. Краску смывают водой, препарат высушивают и просматривают под микроскопом с иммерсионной системой. При окраске метиленовым синим на фоне лейкоцитов и эпителиальных клеток, протоплазма которых бледно-голубого цвета, а ядра – синего, выделяются интенсивно прокрашенные гонококки. Эта окраска имеет лишь ориентировочное значение при микроскопической диагностике гонореи, так как все кокки окрашиваются в синий цвет..      При бактериоскопической диагностике гонореи обязательно применяют метод окраски мазков по Граму, основанный на свойстве гонококка обесцвечиваться спиртом. Кокки, не относящиеся к роду нейссерий, остаются окрашенными.      Окраска мазков по Граму. Реактивы и растворы: 1. 1% водный раствор кристаллического фиолетового. (Краску растворяют в горячей дистиллированной воде, раствор охлаждают и фильтруют через двойной бумажный фильтр). 2. Раствор Люголя (1 г кристаллического йода, 2 г калия йодида, 300 мл дистиллированной воды). 3. 96% этиловый спирт. 4.1% водный раствор нейтрального красного.      На высохший и фиксированный на пламени мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги по размеру предметного стекла или несколько меньше, наливают раствор кристаллического фиолетового. Через 1-2 мин бумагу с краской снимают, мазок смывают водой и на 0,5-1 мин в зависимости от толщины мазка заливают раствором Люголя. После этого раствор сливают и мазок помещают в ванночку со спиртом для обесцвечивания под визуальным контролем, погружая и вынимая его из спирта до тех пор, пока с него не перестанут стекать струйки краски бледно-серого цвета. Препарат быстро промывают в воде, на 2 мин наливают раствор нейтрального красного, затем опять промывают в воде и высушивают на воздухе. Препарат помещают под микроскоп с иммерсионной системой при плоском зеркале и открытой диафрагме. В мазке, окрашенном по Граму, на розовом фоне протоплазмы лейкоцитов выделяются гонококки ярко-розового цвета. Кроме того, гонококки могут локализоваться в нейтрофильных гранулоцитах. Часто они располагаются на эпителиальных клетках или под ними. №97. Бактериологическая диагностика гонореи. Бактериологический посев на гонорею - исследованию подлежат лица с клиническими проявлениями гонореи, наличием в анамнезе подозрительных на гонорею половых контактов, возможность заражения гонореей в бытовых отношениях, с характерными результатами микроскопического анализа выделений.

Бактериологический посев проводят пациентам с целью контроля лечения гонореи, но не ранее 8-10 дня.

Микроскопия мазков выделений из уретры при диагностике уретрита у мужчин имеет чувствительность 90% и специфична в 100% случаев, если видны внутриклеточные грамм-отрицательные диплококки — нейсерии гонореи. У женщин мазки из шейки матки менее чувствительны, по сравнению с бактериологическим посевом (65%), поэтому необходим именно посев.

Метод определения

Бактериологический посев выделений на шоколадный агар для гонореи.

Нормальный результат бактериологического посева на гонорею

Отрицательны результат — отсутствие в материале гонококков

Материал для исследования для бактериального посева на гонорею

Исследуемый материал у женщин - отделяемое уретры, влагалища, цервикального канала, прямой кишки.

У мужчин - отделяемое уретры и прямой кишки.

Возможен анализ мазков из глотки, глаза, крови, спинномозговой жидкости, мочи, других биожидкостей. Материал следует немедленно транспортировать в лабораторию. Не охлаждать. Засеянные образцы до отправления в лабораторию необходимо поместить в СО₂ инкубатор при температуре +37°С, так как гонококки лучше размножаются в среде с углекислым газом.

№ 98.Серологическая диагностика гонореи. Единственной серологической реакцией, используемой при диагностике гонореи, является РСК (реакция Борде-Жангу), хотя и она применяется всё реже. Реакцию Борде-Жангу рекомендуется проводить при хронической и осложнённой гонорее, особенно в случаях, когда заболевание не подтверждено бактериологически.      Серологические исследования (реакция Борде-Жангу, реакция определения гонококкового антигена), а также кожно-аллергическая проба с гонококковой вакциной имеют лишь вспомогательное значение и непригодны ни для доказательства гонококковой инфекции, ни для установления излеченности.

№99. Иммунитет при гонорее.не формируется ,часто регистрируется реинфекция