17. Какие виды микроскопов Вы знаете?

Кроме биологического микроскопа различают стереоскопический, контактный, темнопольный, фазово-контрастный, интерференционный, ультрафиолетовый, инфракрасный, поляризационный, люминесцентный, рентгеневский, сканирующий, телевизионный.голографический, микроскоп сравнения и др.

При микроскопии в темном поле лучи, освещающие объект, не попадают в объектив микроскопа, поле зрения остается темным, а объект на его фоне кажется светящимся. Эффект темного поля создается при помощи специального конденсора (параболоид или кардиоид) или обычного конденсора с прикрытой кружком черной бумаги центральной частью.

Для наблюдения в темном поле свет устанавливают и центрируют, как для светлого поля, и, заменив конденсор на специальныйприбавляют свет до максимума, раскрыв до отказа диафрагму и включив реостат осветителя. Препараты для исследований в темном поле должны быть приготовлены на очень чистых предметных и покровных стеклах определенной толщины: предметные - не более 1,2 мм, покровные - 0,17мм. Готовят препарат по типу раздавленной капли. Между препаратом и конденсором помещают иммерционное масло - каплю его наносят на верхнюю линзу конденсора. После этого, поднимая и опуская конденсор, добиваются появления в поле зрения светлого пятна, которое с помощью специальных регулирующих винтов конденсора выводят в середину поля зрения. Затем с помощью увеличения переходят к наблюдению.

18. Что Вы понимаете под фазово-контрастной микроскопией?

С помощью фазово-контрастной микроскопии могут быть исследованы без предварительной обработки бесцветные, прозрачные объекты, детали строения которых оптически мало различаются между собой.

Распространение световых волн в прозрачных однородных объектах не сопровождается потерей интенсивности света. Меняется только скорость прохождения через, объект, по сравнению со скоростью распространения света в окружающей среде. Она будет большей или меньшей в зависимости от того, будет ли показатель светопреломления объекта, соответственно меньше или больше, чем в окружающей среде. Эти изменения, называемые иначе фазовыми так как при них меняется только фаза колебаний прошедшего света, характерны для большинства биологических объектов (живых клеток,срезов тканей и т.д.).

Человеческий глаз хорошо определяет изменения интенсивности света, наступающие при прохождении через окрашенные (амплитудные) препараты, когда меняется амплитуда колебаний света. Однако этот глаз не способен воспринимать фазовые изменения света. Поэтому прозрачные неконтрастные (фазовые) объекты при обычном микроскопическом исследовании остаются невидимыми.

Zernike предложил специальное устройство конденсора и объектива, которые регулируют изменение фазы световых волн и превращают разность фаз в разность интенсивностей, благодаря чему детали строения объекта становятся доступными для глаза.

Для работы по методу фазового контраста нужно, кроме обычного биологического микроскопа, иметь еще специальное устройство. Установку устройства производят следующим образом. Конденсор и объектив заменяют фазовыми, фазовый конденсор поворотом револьверного диска устанавливают на 0. Это положение соответствует обычному светопольному конденсору. Затем, поместив на предметный столик препарат и сфокусировав его, приступают к наладке освещения.

При исследовании методом фазового контраста основным условием является оптимальная освещенность, которая достигается установкой света по Келлеру. Для этого устанавливают осветитель на расстоянии 30-40 см от микроскопа и, перемещая патрон с лампочкой или весь осветитель, добиваются четкого изображения нити накала лампы на закрытой полностью диафрагме конденсора так, чтобы это изображение полностью заполняло отверстие конденсора. Закрыв диафрагму осветителя, открывают диафрагму конденсора и, перемещая конденсор, добиваются резкого изображения диафрагмы осветителя в поле зрения микроскопа.

Чтобы яркий свет не слепил глаза, предварительно уменьшают с помощью реостата накал нити лампы. И, наконец, с помощью зеркала изображения отверстия диафрагмы устанавливают в центре поля зрения, а диафрагму осветителя открывают так, чтобы было освещено все видимое поле зрения. Раскрывать диафрагму больше не нужно, так как это не усилит освещенности, а лишь уменьшит контрастность за счет рассеянного света.

Затем устанавливают револьверный диск на то число, которое соответствует выбранному объективу: например, при объективе х40 в окошечке также устанавливают цифру 40. Вынув окуляр, на его место устанавливают вспомогательный микроскоп и настраивают его на изображение двух колец (кольцевая диафрагма конденсора и фазовая пластинка). Центрировочным устройством конденсора добиваются совмещения колец. Заменив вспомогательный микроскоп окуляром, можно производить исследования препарата.