1. Оксидазы - ферменты, катализирующие окислительные процессы молекулярным кислородом. Среди них особое значение имеет миелопероксидаза (мп).

Миелопероксидаза – является лизосомальным ферментом, катализирующим в присутствии перекиси водорода окисление различных субстратов. Она локализуется преимущественно в специфических азурофильных гранулах в цитоплазме гранулоцитов и является маркером клеток миелоидного ряда. Миелопероксидаза выявляется в клетках гранулоцитарного ряда, начиная с миелобласта. Активность фермента повышается по мере созревания клеток. Однако, по мере дифференцировки их в зрелые клетки, активность фермента снижается. В клетках миелопероксидаза участвует в реакциях разрушения токсичной перекиси водорода. В цитохимических реакциях активность фермента определяется по окислению хромогенов (бензидина, о-дианизидина и других) по методу Грэхема–Кнолля или его модификаций. Реакция используется главным образом с целью диагностики острых лейкозов.

2. Фосфатазы входят в состав гидролаз. Эти ферменты широко распространены в клетках человека и животных. Они участвуют в обменных процессах с жирами, полисахаридами и нуклеопротеидами. К ним относятся такие ферменты как кислая фосфатаза и щелочная фосфатазы.

Кислая фосфатаза (КФ) – катализирует освобождение фосфата из спиртовых или фенольных моноэфиров при кислой рН среды. Кислые фосфатазы локализованы в лизосомах и цитохимически выявляются благодаря образованию окрашенных участков красного цвета в местах гидролиза субстрата. В качестве субстрата могут быть использованы нафтол-AS-фосфат, а-нафтилфосфат натрия, нафтол-А8-О-фосфат и др. Кислая фосфатаза присутствует в большинстве клеток крови и костного мозга. В гранулоцитах, моноцитах, эозинофилах и базофилах она выявляется, начиная с незрелых клеток этих рядов, где ее активность наиболее высокая.

Щелочная фосфатаза (ЩФ) –это фермент, которыйспособен освобождать фосфат, катализируя отщепление фосфатных групп из фосфомоноэфиров в щелочной среде и принимает участие в обмене липидов и нуклеиновых кислот. Содержится исключительно в зрелых нейтрофилах. В периферической крови активность щелочной фосфатазы значительно выше, чем в клетках костного мозга. Фермент выявляется в виде желто-коричневых гранул в цитоплазме.

3.Неспецифическиеэстеразы (НЭ) также относятся к гидролазам. Эти ферменты способны гидролизовать простые эфиры N-свободных спиртов жирных кислот. Это весьма неоднородная группа энзимов, названия которых обусловлены субстратом, который они гидролизуют. Получено более 9 изоферментов НЭ. Фракции 1, 2, 7, 8, 9 выявляются при использовании нафтол-АБ-О-хлорацетата и представляют активность хлорацетатэстеразы, которая присутствует в гранулоцитах. Фракции 3, 4, 5, 6 взаимодействуют с эфирами α-нафтилацетата и представляют собою НЭ, выявляемые в моноцитах, плазматических клетках и тромбоцитах. Наибольший интерес для гематологов представляют хлорацетатэстераза, α-нафтилацетатэстераза, кислая α-нафтилацетатэстераза. Неспецифическиеэстеразы являются лизосомальными ферментами.

α-Нафтилацетатэстераза(αНАЭ) обнаруживается во всех миелоидных клетках, но наибольшая ее активность определяется в моноцитах. В клетках эритроидного ряда в норме она не определяется.

Кислаянафтилацетатэстераза– это фермент, локализующийся в лизосомальных гранулах. Его активность выявляется в реакции с α-нафтилацетатом в кислой среде при рН 5,8. Она характерна для Т-хелперов. Кроме того, она выявляется в клетках моноцитарного ряда.

Хлорацетатэстеразу (ХАЭ) называют гранулоцитарной. Как и миелопероксидаза, она является маркером нейтрофилов. Активность фермента выявляется в виде гранул синего цвета.

Сдвоенную реакцию на ХАЭ и αНАЭ проводят последовательно на одном мазке. Это позволяет разделить клетки гранулоцитарной и моноцитарной линий, что имеет значение при диагностике миеломоноцитарного лейкоза.

Реакция Браше.Метод служит для выявления РНК. Используется реактив из смеси двух красителей:метилового зелёного и пиронина.Пиронин специфически окрашивает РНК в красный цвет.Поэтому на препарате ядрышки (в составе ядра) и рибосомбогатые участки цитоплазмы имеют красный цвет.Другие структуры ядра (помимо ядрышек) - зелёные.

Реакция Фёльгена.Основной реактив - фуксинсернистая кислота (реактив Шиффа).ДНК-содержащие структуры окрашиваются в пурпурно-красный цвет.

Цитохимическое исследование липидов.Липиды локализуются в цитоплазме клеток главным образом в мембранах органелл и обнаруживаются преимущественно в нейтрофильных гранулоцитах. Играют важную роль в проницаемости мембран. Цитохимическое исследование липидов основано на применении красящих веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черныйсудан и др.). Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).