9. Хроматографические методы анализа.

С целью обнаружения флавоноидов в растительном материале широко используется хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента.

Обнаружение компонентов на хроматограмме осуществляется просматриванием их в УФ свете.

При этом флавоны, флавонол-3-гликозиды, флаваноны, халконы и их 7-гликозиды – в виде желтых или желто-зеленых пятен; флавонолы и их 7-гликозиды – в виде желтых или желто-зеленых пятен; ксантоны в виде оранжевых пятен.

Изофлавоны при этом не проявляются.

После просматривания в УФ свете хроматограммы можно обработать одним из реактивов:

1) 5 %-ным спиртовым раствором AlCl₃ c последующим нагреванием при 105 ⁰С в течение 3-5 минут; (ярко-желтая окраска пятна в видимом свете и яркую желто-зеленую флуоресценцию в УФ –свете);

2) с 5 %-ной SbCl₃ в четыреххлористом углероде (реактив Мартини-Беттоло); Желтая или желто-оранжевая окраска указывает на наличие флавонов, флавонолов, флаванонов и изофлавонов;красная или красно-фиолетовая – халконов.

3) с 2 %-ным спиртовым раствором щелочи

4) при обработке пятна парами аммиака усиливается голубая флуоресценция (изофлавоноиды)

что позволяет получить зоны с более яркой флуоресценцией в УФ свете.

Реактив Вильсона (раствор борной и б\в лимонной кислоты в б\в метаноле)

5) Реакция азосочетания – на наличие 7-оксифлаванолов, 7-оксиизофлаванолов.

10. Количественное определение.

В последние годы все большее распространение получают различные:

1. физико-химические методы анализа, которые имеют ряд существенных преимуществ в сравнении, например, с гравиметрическими и титрометрическими методами, а именно, быстрота и точность определения, обнаружение даже незначительных количеств и, что особенно важно, возможность выделения отдельных флавоноидов из растительного сырья.

К таким методам относятся фотоэлектроколориметрия, спектрофотометрия, денситометрия с использованием хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента.

Сущность хроматоденситометрического метода заключается в выделении и разделении флавоноидов с непосредственной количественной денситометрической оценкой окрашенной зоны на хроматограмме.

Метод имеет преимущества в быстроте проведения анализа и точности определения, так как в данном случае исключается стадия элюирования.

Используется фотоколориметрический метод, основанный на измерении оптической плотности окрашенных растворов, полученных в цветных реакциях флавоноидов с солями различных металлов (алюминия, циркония, титана, хрома, сурьмы), с лимонно-борным реактивом и на реакции восстановления цинком или магнием в кислой среде.

Известна цветная реакция флавоноидов с азотнокислым и уксуснокислым уранилом, позволяющая количественно определять рутин в смеси с кверцитином.

В настоящее время широко используется метод спектрофотометричекий.

11. Заготовка сырья. Пути использования сырья, содержащего флавоноиды.

Проводится в фазу наибольшего накопления флавоноидов:

бутонизации: бутоны софоры японской, траву череды;

начала цветения: цветки бессмертника песчаного, пижмы, трава пустырника;

массового цветения: цветки василька синего, траву зверобоя, горцев перечного, почечуйного и птичьего, астрагала шерстистоцветкового, фиалки, сушеницы топяной;

вегетации: траву хвоща полевого, листья чая китайского;

плодоношения: плоды боярышника, рябины черноплодной, софоры японской;

осенью корни стальника и шлемника байкальского;

корни солодки можно заготавливать круглый год.

В фазу цветения собирают цветки василька синего, пижмы, бессмертника, траву сушеницы, горцев, пустырника.

Особенностью сбора сушеницы является выдергивание растения с корнем.

Пустырник собирают при цветении нижних цветков. В фазе полного цветения наступает "перезревание", чашечка твердеет и становится колючей, а сырье считается некачественным.

Траву череды собирают в период бутонизации. После цветения образуются плоды - семянки с колючими остями.

Сбор дикорастущего сырья производят вручную с использованием ножей, ножниц и серпов.

Для сбора культивированных растений (цветки бессмертника, плоды боярышника) применяют малую механизацию.

Сушка.

Так как флавоноиды содержатся в сырье преимущественно в виде гликозидов, то сырье сушат в сушилках с искусственным и естественным обогревом. Плоды сушат при температуре 70-90 °С, траву - 50-60 °С; цветки – 40 °С. Не допускается сушка на солнце.

Хранение.

Сырье необходимо оберегать от влаги и прямых солнечных лучей. Сохранять в плотно укупоренной таре, в хорошо проветриваемом помещении по общему списку.

Большинство сырья, содержащего флавоноиды, разрешено к продаже без рецепта врача по приказу № 287 от 19.07.99

В экстемпоральной рецептуре ЛРС используется в виде настоев, отваров и сборов.

На фармацевтических фабриках получают экстракционные препараты:

настойки: пустырника, зверобоя, шлемника байкальского, боярышника, водяного перца;

жидкие экстракты боярышника, водяного перца;

сухой экстракт цветков бессмертника, травы пустырника.

На химико-фармацевтических заводах выпускают:

«Рутин» и «Кверцетин» из бутонов софоры японской;

«Флакарбин» и «Ликвиритон» из корней солодки;

«Новоиманин» из травы зверобоя;

«Танацехол» из цветков пижмы;

«Фламин» из цветков бессмертника и др.

Каждый год номенклатура препаратов пополняется за счет разработки новых ГЛС.

На заводах по переработке ЛРС выпускают сырье в резано-прессованном виде, в виде брикетов и сборов.