3. Методы, применяемые в анализе синтетических аналогов папаверина и многокомпонентных лекарственных форм на их основе

3.1. Хроматографические методы

Для идентификации изохинолиновых алкалоидов предложены хроматографические методики [14].

Установлено, что для определения примесей в лекарственных формах, содержащих производные изохинолина, обычно используются хроматографические методы – ТСХ и ВЭЖХ.

Сравнительный анализ имеющихся условий определения посторонних примесей дротаверина гидрохлорида методом ТСХ, включенных в действующие НД, показал, что:

- анализ, как правило, проводится на пластинах Kieselgel F254 (предварительно активированных или неактивированных).

- оценка результатов проводится в ультрафиолетовом свете при длинах волн 254 нм (фиолетовые пятна на желтовато-зеленоватом фоне), редко - при 366 нм (пятна голубого цвета на темном фоне), очень редко – с использованием модифицированного реактива Драгендорфа и 0,05М раствора серной кислоты.

- используется около десятка подвижных фаз, включающих в себя такие растворители, как татрагидрофурaн, этилацетат, спирты, амины, органические кислоты, бензол и его гомологи, хлороформ, н-гексан и др. В одном НД предусмотрено последовательное хроматографирование в 2-х подвижных фазах.

- в качестве растворителей проб используется хлороформ, метанол, буферные растворы с различным рН

- в роли вещества свидетеля, как правило, используется дротаверин, редко – дротавералдин (основной продукт окисления)

Для выбора оптимальных условий оценки содержания примесей в дротаверина гидрохлориде методом ТСХ нами было изучено хроматографическое поведение дротаверина в следующих ПФ:

1. бензол-спирт метиловый-концентрированный раствор аммиака (40:8:0.1)

2. ксилол- метилэтилкетон- спирт метиловый- диэтиламин (20:20:3:1)

3. дихлорэтан- спирт метиловый-ацетон-диэтиламин (80:10:5:5)

4. бензол-спирт метиловый-раствор аммиака концентрированный (20:4:0,1) .

Оптимальной оказалась подвижная фаза: бензол, спирт метиловый, раствор аммиака концентрированный - 20:4:0,1.

В качестве базового растворителя проб использован хлороформ, поскольку дротаверина гидрохлорид в нем легко растворим, а возможность его гидролиза в данном случае минимальна.

Изучено влияние активирования пластин на результат хроматографирования. Экспериментально установлено, что активирование пластин в течение 1 часа при 110^оС не оказывает существенного влияния на характер хроматограммы, поскольку расположение пятен дротаверина и примесей на активированных и неактивированных пластинах практически ничем не отличается.

Выбран способ детектирования и вещество-свидетель. В качестве вещества свидетеля был использован непосредственно дротаверин, так как в РФ стандарты дротавералдина, либо других известных примесей дротаверина не являются широко доступными, а чувствительность определения как для основного, так и для примесных веществ составляет 0,25 мкг. Для детектирования был выбран наиболее распространенный способ – оценка в ультрафиолетовом свете при 254нм [16].

Для определения посторонних примесей в комбинированном препарате «СПАЛГИН форте» в качестве основной выбрана подвижная фаза: бензол, спирт метиловый, раствор аммиака концентрированный - 20:4:0,1, которая, как показано выше, пригодна для определения содержания примесей как дротаверина гидрохлорида, так и анальгина.

В качестве растворителя использовали хлороформ (применяемый в анализе посторонних примесей каждого индивидуального компонента препарата).

Однако в процессе исследований было отмечено, что присутствие дротаверина гидрохлорида улучшает растворимость анальгина в хлороформе. Хроматографирование хлороформного экстракта модельной смеси таблеток СПАЛГИН форте показало, что дротаверина гидрохлорид частично разрушается в растворе. Этот факт, вероятно, обусловлен влиянием анальгина.

С целью устранения описанного выше взаимного влияния компонентов рассмотрены различные способы обработки хлороформа и получения хлороформных растворов исследуемого препарата.

Использование безводного хлороформа не оказало существенного влияния на результаты хроматографирования – вид хроматограмм, полученных при применении коммерческого и безводного хлороформа одинаков; в случае использования хлороформа, насыщенного аммиаком, либо раствором сульфита натрия, общий вид хроматограммы также не изменяется.

При извлечении модельных смесей анальгина и дротаверина гидрохлорида в хлороформ из водного раствора с рН 8-9 результаты были сопоставимы с полученными при растворении непосредственно в хлороформе, но при этом интенсивность пятна примеси с Rf 0,58 (дротавералдин) несколько снизилась.

Оптимальные результаты были получены после обработки хлороформа раствором натрия гидроксида и натрия сульфитом.

Двумерное хроматографирование смеси анальгина и дротаверина гидрохлорида в выбранных условиях показало, что в процессе хроматографирования не происходит разрушения соединений. В результате первого хроматографирования отмечен рост интенсивности пятна примеси дротаверина гидрохлорида с Rf 0,58 (дротавералдин) по сравнению с аналогичным на хроматограмме дротаверина гидрохлорида в чистом виде, при последующем хроматографировании в перпендикулярном направлении образования подобного пятна не наблюдалось, то есть, качественный и количественный состав примесей не меняется.

В качестве веществ-свидетелей выбраны дротаверин и 4-аминоантипирин, что обусловлено результатами исследования по определению чувствительности обнаружения соединений и, кроме того, доступностью указанных веществ, о чем говорилось ранее.

Типичная хроматограмма, полученная в выбранных условиях представлена на рисунке 2.

1 - препарат «СПАЛГИН форте»

2 - дротаверина гидрохлорид, Rf=0,48

3 – анальгин, Rf= 0,06

4 - 4-аминоантипирин, Rf=0,21

5 – антипирин, Rf=0,24

6 – 4-метиламиноантипирин, Rf=0,26

7- дротавералдин, Rf=0,58

Рисунок 2. Хроматографическое разделение примесей анальгина и дротаверина гидрохлорида

На хроматограмме обнаружено несколько пятен незначительного размера и интенсивности между пятнами анальгина и дротаверина (исключая примеси анальгина – до шести, которые на рисунке не представлены) [17].

Предложена методика количественного анализа нового многокомпонентного лекарственного препарата «Пентамакс» методом ВЭЖХ (рис. 3). Методом "введено-найдено" проанализированы модельные смеси, содержащие все действующие и все вспомогательные вещества табле­ток, показано отсутствие систематической погрешности определения. Проанализированы опытно-экспериментальные образцы таблеток. Полученные результаты соответствуют требованиям нормативно-технической документации и технологическим загрузкам.

Таблетки "Пентамакс" - новый оригинальный препарат отечественного производства (г. Курск). В состав препарата входят следующие компоненты: парацетамол, ибупрофен, кофеин), дротаверина гидрохлорид, фенобарбитал, а также ряд вспомогательных веществ [26].

Рис. 3. Хроматограмма испытуемого раствора для анализа таблеток "Пентамакс" : 1 - парацетамол, 2 -кофеин, 3 - фенобарбитал, 4 - дротаверин, 5- ибупрофен